Determinación de Fosforo en Ácido Ribonucleico
Enviado por juan.ma • 15 de Noviembre de 2015 • Documentos de Investigación • 1.594 Palabras (7 Páginas) • 560 Visitas
Universidad Autónoma del Estado de México[pic 1][pic 2]
Facultad de Química
Licenciatura: Químico Farmacéutico Biólogo
Laboratorio de Bioquímica metabólica
Práctica 7: Determinación de Fosforo en Ácido Ribonucleico
Equipo 5
Cindy Astrid Alcántara Guadarrama
Fabiola Díaz Álvarez
María Fernanda Ramírez Torres
Janet Elizabeth Trujillo Carrera
Quinto semestre
Grupo 52
Profesora: Cynthia Elena Enríquez García
Noviembre de 2015
PRÁCTICA NÚMERO 7
Determinación de Fosforo en Ácido Ribonucleico
OBJETIVO: Desarrollar la habilidad cuantificar fosforo presente en la muestra obtenida de hígado de rata.
MARCO TEORICO
Los ácidos nucleicos son compuestos nitrogenados de elevado peso molecular que se pueden encontrar en las células asociados a proteínas formando complejos llamados núcleo-proteínas. Estas proteínas tienen carácter básico mientras que los ácidos nucleicos son ácidos.
Se conocen dos grupos de ácidos nucleicos: RNA (ácido ribonucleico) y el DNA (ácido desoxirribonucleico). La hidrólisis controlada de RNA y DNA produce nucleótidos. Si la hidrólisis continúa se producen nucleósidos y finalmente fosfatos, azúcares y bases púricas y pirimidínicas.
Una hidrólisis ácida remueve todas las bases púricas (hidrólisis de uniones N-glicosídicas entre pentosa y las bases púricas) sin afectar las uniones fosfodiester del esqueleto nucleotídico, por lo tanto obtenemos como producto ácidos nucleicos sin bases púricas.
La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol. El ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando ribosa, bases púricas, pirimidínicas y acido fosfórico. La pentosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando un producto verde que demuestra la presencia de DNA y RNA.
La heterogeneidad del RNA total recogido de hígado de rata, se puede poner de manifiesto por su resolución mediante una columna, situación en la que se obtienen números picos distintos dependiendo de sus pesos moleculares y que bajo condiciones muy controladas de extracción podrían servir para aislamiento parcialmente purificado de algunas clases de RNA de bajo peso molecular.
Existen algunas pruebas coloreadas específicas de las purinas, nucleósidos y nucleótidos que sirven fundamentalmente para reconocer a la ribosa y a la desoxirribosa en muy pequeñas cantidades o en desarrollo cromatográfico, así también se puede identificar elementos presentes, como por ejemplo el fósforo, la mayoría de los métodos para el análisis del fósforo se basan en la ruptura del ortofosfato, dando lugar a una forma insoluble que puede determinarse después por métodos gravimétricos, nefelométricos o polarográficos.
Fósforo en el organismo
El fosforo es un elemento químico muy necesario y relevante para el funcionamiento de la célula, ya que por un lado forma parte del ADN, ARN y de las membranas celulares, y por el otro, se le necesita para actividades relacionadas con la producción de energía y numerosas otras funciones del metabolismo. También es un constituyente importante de los huesos y dientes, siendo el 85% del fósforo del organismo parte de estas estructuras.
La determinación del fósforo inorgánico se efectúa con el empleo de diferentes métodos como son la titulación acidimétrica, procedimientos enzimáticos, la determinación fotométrica del compuesto no reducido a 340 nm, la determinación fotométrica en el espectro visible de la reacción del fósforo con diferentes compuestos cromogénicos entre ellos el Ácido Molibdivanadofosfórico, el compuesto formado con verde malaquita, entre otros.
De los métodos mencionados, el Método Ultravioleta (UV) presenta mayor aceptación. Este método se basa en las modificaciones hechas al método propuesto por Daly y Ertingshausen en 1972, el cual establece que la mayoría de los métodos para la determinación del Fósforo inorgánico se basan en la reducción de un complejo de Fosfomolibdato con un agente reductor, dando por resultado la posterior formación de Molibdeno azul. Este método posee varias ventajas entre las que se incluyen mayor sensibilidad, estabilidad, simplicidad y rapidez.
El fundamento de la técnica se basa en la reacción de los Molibdatos con los Fosfatos para formar compuestos como el Fosfomolibdato Amónico ((NH4)3[P(MO3O10]4) que presentan un máximo de absorción en la zona del espectro UV, a una longitud de onda de 340 nm.
Fósforo inorgánico + Molibdato de Amonio Complejo de Fosfomolibdato no reducido (compuesto amarillo).[pic 3]
PO43- + 3NH4- + 12MoO4 H2PO4 (NH4)312MoO3 + 12H2O.[pic 4]
Anexo
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METODOLOGÍA
[pic 6]
Curva tipo de calibración
Preparar 7 tubos de ensayo debidamente etiquetados la siguiente tabla:
Tubo | Solución patrón de Fósforo(mL) | Acido Sulfúrico 0.25 M(mL) | Molibdato de Amonio al 5 %(mL) | Solución reductora (mL) |
Blanco | 0.0 | 9.2 | 0.4 | 0.4 |
1 | 0.1 | 9.1 | 0.4 | 0.4 |
2 | 0.2 | 9.0 | 0.4 | 0.4 |
3 | 0.4 | 8.8 | 0.4 | 0.4 |
4 | 0.8 | 8.4 | 0.4 | 0.4 |
5 | 1.2 | 8.0 | 0.4 | 0.4 |
6 | 1.5 | 7.7 | 0.4 | 0.4 |
[pic 7]RESULTADOS :A partir de concentración de la solución patrón de Fósforo realice los cálculos de la concentración de Fósforo correspondientes en cada tubo de la curva de calibración y registre sus resultados en la siguiente tabla:
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