El objetivo del trabajo práctico es poner en evidencia el efecto que presenta el pH y la temperatura sobre la estabilidad y la actividad de la enzima Fosfatasa Ácida.
yanina1881Trabajo31 de Octubre de 2015
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Alumno: | |
Profesor: | |
Instructores: | |
Materia: | Bioquímica I |
OBJETIVO.
El objetivo del trabajo práctico es poner en evidencia el efecto que presenta el pH y la temperatura sobre la estabilidad y la actividad de la enzima Fosfatasa Ácida.
METODOLOGIA.
- Efecto del pH sobre la temperatura.
- Efecto de la temperatura sobre:
- Estabilidad.
- Actividad.
Se siguió el protocolo dado. “Trabajo de laboratorio: Efecto de pH y la temperatura sobre la actividad y estabilidad enzimática"
RESULTADO.
- Efecto de pH sobre la actividad.
Los valores obtenidos al medir la absorbancia a 400 ηm se muestran en la tabla, detallada a continuación:
Tiempo(min) | pH = 4 | pH = 5,6 | pH = 7 | pH = 9 |
3 | 0,07 | 0,123 | 0,07 | 0,012 |
6 | 0,22 | 0,134 | 0,021 | |
9 | 0,156 | 0,311 | 0,202 | 0,025 |
12 | 0,203 | 0,416 | 0,254 | 0,025 |
15 | 0,253 | 0,511 | 0,31 | 0,038 |
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Las velocidades iniciales obtenidas (a partir de las pendientes de las rectas de regresión) fueron:
pH = 4) y = 0,0152x + 0,0225 → V0 = 0,0152 µmol/min.
pH = 5,6) y = 0,0324x + 0,0246 → V0 = 0,0324 µmol/min.
pH = 7) y = 0,02x + 0,014 → V0 = 0,02 µmol/min.
pH = 9) y = 0,0019x + 0,0074 → V0 = 0,0019 µmol/min.
Una vez obtenidas las velocidades iniciales, se grafica el pH vs la velocidad inicial:
pH | Vo (µM/min) |
4 | 0,0152 |
5,6 | 0,0324 |
7 | 0,02 |
9 | 0,0019 |
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- Efectos de la temperatura.
En primer lugar, los datos obtenidos al medir el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática fueron:
Abs (42 C) | Tiempo (min) | Abs (54 C) | Tiempo (min) | Abs (74 C) | Tiempo (min) |
0,1985 | 3 | 0,346 | 3 | 0,293 | 3 |
0,3131 | 6 | 0,528 | 6 | 0,3855 | 6 |
0,4475 | 9 | 0,264 | 9 | 0,3833 | 9 |
0,5978 | 12 | 0,473 | 12 | 0,4233 | 12 |
0,6973 | 15 | 0 | 15 | 0,4453 | 15 |
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Las velocidades iniciales obtenidas (a partir de las pendientes de las rectas de regresión) fueron:
31 °C) No se realizo, debido a la mala preparación de la mezcla de reacción.
42 °C) y = 0,0427x + 0,0661 → Vo = 0,0427 µM/min.
54 °C) y = 0,0607x + 0,164 → Vo = 0,0607 µM/min. (aquí se descartaron los últimos 3 puntos, debido a que escapaban de la linealidad)
74 °C) y = 0,0114x + 0,2834 → Vo = 0,0114 µM/min.
Por ultimo, se procedió a medir el efecto de la temperatura sobre la estabilidad enzimática, que arrojaron los siguientes valores:
Tiempo (min) | Abs (31 °C) | Tiempo (min) | Abs (42 °C) | Tiempo (min) | Abs (54 °C) | Tiempo (min) | Abs (74 °C) |
3,283 | 0,179 | 3,167 | 0,123 | 3 | 0,07 | 3 | 0,031 |
6,25 | 0,313 | 6 | 0,212 | 6 | 0,1 | 6 | 0,034 |
9 | 0,461 | 9 | 0,319 | 9 | 0,129 | 9 | 0,041 |
12 | 0,578 | 12 | 0,383 | 12 | 0,172 | 12 | 0,043 |
15 | 0,688 | 15 | 0,49 | 15 | 0,204 | 15 | 0,046 |
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