El punto isoelectrico

hhhPUNTO ISOELECTRICO

Todas las macromoléculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan

en agua. Una característica de las proteínas y otros biopolímeros es que la carga total que

adquieren depende del pH del medio.

Así, todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el

que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier

ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente (irreversible).

Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden

existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catiónicos, neutros y aniónicos.

Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo

suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y

glutámico estarían en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían

protonados (-NH3

+).

De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto estaría

cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estarían desprotonados

(COO-) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH2).

De lo anterior se deduce que las proteínas tienen un pH característico al cual su

carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI).

En el punto isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y

negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para ser precipitada al

disminuir su solubilidad y facilitar su agregación.

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Físico-Química de Biomoléculas

Licenciatura en Biotecnología

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Si suponemos una proteína formada únicamente por aminoácidos sin grupos

laterales ionizables la carga neta de la proteína dependería exclusivamente de la protonación /

desprotonación de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad las proteínas están

formadas por multitud de aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos y la carga va a

depender de los grupos ionizables que poseen los aminoácidos que la componen (anexo I) y

del pH del medio.

OBTENCIÓN DE OVOALBÚMINA:

1. De un huevo de gallina separa la yema y

preserva la clara1.

2

2. Añade agua destilada y agita hasta que aún

quede una mezcla espesa.

3. Coloca en un tubo de ensayo una pequeña

cantidad de clara de huevo.

4. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar

el tubo a la llama del mechero2.

5. Agita hasta obtener una disolución

homogénea. Caso de que existan flóculos,

eliminarlos mediante centrifugación a 4000

rpm durante 5 min. Con ello se obtiene una

disolución de aprox. 5 mg/ml de proteína3.

6. Preserva tanto las aguas madres como el

centrifugado a temperatura de refrigeración

en sendos tubos de ensayo.

REACCIÓN DE BUIRET

Cuando una solución de proteína fuertemente alcalina es adicionada a una solución de sulfato de cobre se obtiene un color púrpura. La reacción es característica de las sustancias que poseen dos grupos -NH-CO- unidos directamente o separados por un átomo de carbono o de nitrógeno. Se trata de una reacción inducida por la unión peptídica pero también puede ocurrir en sustancias no protéicas que posean tal estructura (ejemplo, la biurea o buiret).

CONCLUSIONES

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->La albúmina es una proteína que se encuentra en gran abundancia en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->La concentración normal de albúmina en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por litro, y supone alrededor del 50% de la proteína plasmática. El resto de proteínas presentes en el plasma se llaman en conjunto globulinas.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->La albúmina es fundamental para el mantenimiento de la presión oncótica, necesaria para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimiento intravascular y el extravascular.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->El plasma origina el suero sanguíneo cuando se coagula la sangre.

Informe de laboratorio #5

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES, ALBÚMINA Y GLOBULINA

PROTEÍNAS

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc.

La proteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso.

Conclusión

En esta

...