Espectroscopía de Absorción Molecular

Tarea 1

Espectroscopía de Absorción Molecular

Instrucciones generales:

• Responda las preguntas descritas a continuación. Como respuesta, suba el archivo en formato word y nómbrelo de la siguiente manera antes de enviarlo: grupox.tarea1 (donde x corresponde a su grupo).
• Todas las preguntas que involucren cálculos matemáticos deben incluir su desarrollo e indicar claramente el resultado y respuesta de la pregunta. El desarrollo debe ir debajo del enunciado y puede ir escrito directamente en el archivo o como una foto o captura, en el caso de que se haya realizado de manera manual o en algún dispositivo electrónico.
• Las respuestas deben ser redactadas por quienes realizar la tarea. No deben corresponder a copias textuales de otras fuentes.
• No serán recibidas respuesta por otras vías, fuera de plazo o por grupos diferentes a los registrados.
• No borrar los enunciados ni los puntajes indicados en cada caso.

En base al presente enunciado, responda las preguntas que se describen a continuación:

Al laboratorio clínico en el cual usted trabaja, ha llegado una muestra de orina de un paciente, del cual se sospecha falla renal. Es indicador de falla renal una concentración de proteínas superior a 150 mg en 24 hrs.

A pesar de que las proteínas no son compuestos coloreados, han sido determinadas en el espectro visible.

Con este objetivo, se realizó el análisis de proteínas en la muestra de orina utilizando una técnica espectrofotométrica, donde la señal medida corresponde a la absorbancia (A). Con el uso de un estándar de proteínas se realizó las siguientes determinaciones:

C mg/L proteinas        A

0                        0,01

20                        0,23

40                        0,45

60                        0,66

80                        0,89

100                        1,10

Fueron realizadas tres lecturas del blanco, obteniéndose los siguientes valores de R: 0,008; 0,005 y 0,001.

Para la realización de este análisis se ha recolectado una muestra de 1,2 L de orina, correspondiendo a la orina de 24 hrs. De esta muestra, se tomó una alícuota de 25 mL y se aforó a 100 mL, siendo realizada la lectura en triplicado de la absorbancia de esta última solución, entregando los siguientes valores de absorbancia: 0,33; 0.27; 0,38.

1. En una primera etapa se confeccionó un espectrograma. De acuerdo a lo mismo, indique la longitud de onda a la cual realizará las determinaciones cuantitativas. Explique y fundamente su respuesta (máximo 5 líneas) (10 ptos)

[pic 1]

Respuesta: La longitud de onda a la que se realizara las determinaciones cuantitativas es de 595nm, ya que es en esta longitud en la que la muestra presenta la menor transmitancia.

1. ¿Cómo pudo determinar proteínas a dicha longitud de onda si estas no corresponden a compuestos coloreados? Explique (máximo 10 líneas) (10 ptos)

Respuesta: Para compuestos incoloros, que no absorben en el visible se puede hacer reaccionar con un reactivo cromogénico para crear finalmente un compuesto coloreado. Éste reactivo debe cumplir ciertas características tales como, ser estable y soluble en solución, desarrollar rápidamente el color, reaccionar estequiométrica con el analito, no absorber a la longitud de onda donde se va a determinar el complejo, ser selectivo, puro y libre de interferentes. Un método que se puede utilizar en el caso anterior para medir la absorbancia a 595 nm es el método de Bradford, el cual consiste en la interacción del reactivo de bradford con la proteína (incolora) formando finalmente un compuesto coloreado el cual se puede medir sin problema en espectrofotómetro, en el rango visible.

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