ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA MOLECULAR

ESPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA MOLECULAR.

Determinación de quinina en agua tónica

Resultados y discusión

Curva de calibrado

1. Preparación de todas las disoluciones utilizadas como reactivos iniciales

1.1 Disolución de 1L H2SO4(0.05M)

Datos: Mm (H2SO4)=98.078 g/mol

Reactivos iniciales:

H2SO4 96% (p/p), ρ = 1.835 g/ml

Volumen necesario:

n = 0.05 mol → m (H2SO4) = Mm·n = 98.078 g/mol·0.05mol = 4.9039 g

m (total) =m(H2SO4)/0.96=5.1082g

V = m/ ρ = 5.1082g/1.835g/ml = 2.784 mL → V ≈ 2.8 mL (H2SO4)

1.2 Disolución patrón de quinina, 100mL a 1000 mg/L

m (quinina) = 100 mg = 0.100 g

m (quinina)2xH2SO4x H20 =[(782.96g/mol[(quinina)·2H2SO4·H2O])/2x324.43g/mol[quinina]]·m

m[(quinina)2xH2SO4x H20] necesaria = 0.1207 g

m (pesada) = 0.1209 ± 0.0001 g

Concentración de quinina real: 1002 mg/L

Volumen final: 100.0 ± 0.1 mL

Concentración resultante: 1002 ± 1 mg/L

1.3Disolución de quinina, 100 mL a 50 mg/L

Disolución preparara a partir de la anterior.

V necesario =50mg/L·100mL /1002mg/L=4.99mL

Valor más próximo apreciable y medible con los instrumentos disponibles: 5.00 ± 0.015 mL

Concentración de quinina: 50.10 mg/L

Volumen final: 100.0 ± 0.1 mL

Concentración resultante: 50.1 ± 0.2 mg/L

2. Justificar la elección de las longitudes de onda de emisión y excitación para la determinación de la quinina.

A la vista del espectro de absorción de la quinina (incluído en el guión de la práctica), presenta dos máximos de absorción, uno a 250 nm y otro a 347 nm, por lo que la longitud de onda de excitación deberá situarse entorno a uno de estos máximos.

En cuanto al espectro de excitación hay que aclarar que el máximo que aparece a 452 nm se debe a radiación residual de la lámpara. El máximo de absorción de la quinina se produce a 349.5 nm.

Para el espectro de emisión , aparecen dos máximos. El de 347 nm se debe a la radiación de la lámpara, y el de 451 nm es el propio de la quinina.

Hay que tener en cuenta que, aunque sea más intenso el pico de absorción de 250 nm, no da lugar a una fluorescencia óptima, de forma que se escogerá el valor de 349.5 nm para la longitud de onda de excitación, y de 451 nm para la emisión.

3. Construir una tabla en la que se indiquen para cada una de las disoluciones patrón de la curva de calibrado, su preparación a partir de la disolución patrón de quinina de mayor concentración, concentración de las disoluciones (en mg/L), la intensidad de fluorescencia medida y las correspondientes intensidades de fluorescencia corregidas frente al blanco medido.

Disoluciones patrón de quinina

Volúmenes finales: 50.00 ± 0.06 mL en todos los casos

Concentración de quinina (mg/L) | Masa de quinina en disolución (mg) | Volumen necesario de disolución patrón de 50 p.p.m (mL) | Concentración final de quinina(mg/L) | Intensidad de la señal | Señal- blanco |

0.1 | 5x10^-3 | 0.1 | 0.1000 ± 0.0007 | 96.02 | 94.83 |

0.3 | 1.5x10^-2 | 0.3 | 0.300 ± 0.002 | 210.5 | 209.3 |

0.5 | 2.5x10^-2 | 0.5 | 0.500 ±0.004 | 325.4 | 324.2 |

0.7 | 3.5x10^-2 | 0.7 | 0.700 ±0.005 | 469.8 | 486.6 |

1.0 | 5x10^-2 | 1.0 | 1.000 ±0.007 | 627.3 | 622.5 |

0.0 (Blanco) | 0 | 0 | 0 | 1.188 | 0.000 |

4. Representar los valores de intensidad de fluorescencia frente a la concentración de quinina, para cada una de las disoluciones patrón. Ajustar la recta obtenida por mínimos cuadrados, indicando parámetros de dicha recta y el valor del coeficiente de correlación.

Donde 'Y' es la intensidad de la señal instrumental, y 'X' representa la concentración de quinina, en mg/L.

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