Facultad de Educación y Ciencias Humanas.

[pic 1]

Informe de laboratorio

Práctica

                                 Pruebas Cualitativas Para Carbohidratos

Bioquímica

Presentado por:

Presentado a:

 Yudi Carolina Torres Valencia MSc.

Universidad de Córdoba

Facultad de Educación y Ciencias Humanas

Licenciatura en Ciencias Naturales y Educación Ambiental

Lorica - Córdoba

FUNDAMENTOS TEÓRICOS.

PRUEBA DE MOLISH: El ácido sulfúrico concentrado hidroliza los enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan con α-naftol sulfonato, originando un  complejo púrpura. Esta reacción es general para los carbohidratos pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico concentrado.

PRUEBA DE BENEDICT: Es una  modificación de la prueba de felhing, introducida por Benedict.  En ella se usa únicamente una solución, lo cual lo hace mucho más simple con la ventaja adicional de que el reactivo es más estable que el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores.

PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solamente puede ser reducido por monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizar los disacáridos dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de óxido cuproso es menos denso que en los métodos previos y se recomienda dejar el tubo en reposo hasta que el precipitado sedimente.

PRUEBA BIAL  PARA PENTOSAS. Cuando se calientan las pentosas en ácido clorhídrico concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar un color verde azuloso.

PRUEBA DE SELLIWANOFF.  Las cetosas deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rosado; por lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que se está estudiando.

PRUEBA PARA SACAROSA. La sacarosa es el único disacárido común no reductor y por lo tanto no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en solución ácida y luego se ensayan la glucosa y la fructosa resultante.

PRUEBA PARA POLISACÁRIDOS. Los polisacáridos contienen sólo un grupo reductor por varios cientos o más residuos, así que en la práctica, no son reductores. La hidrólisis ácida libera los monosacáridos constituyentes que luego son ensayados.

OBJETIVOS.

• Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de molish.

• Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al reactivo de Benedict.

• Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos específicos.

MATERIALES Y RECTIVOS

• Pipetas de 5 y de 10ml.

• Beakers de 100 y 400ml.

• 10 tubos de ensayo.

• Reactivo de Bial.

• Gradilla

• Reactivo de Selliwanoff.

• Papel tornasol                

• Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa,

• Sacarosa, lactosa, fructosa, almidón, leche (traer de la casa)

• Solución de yodo.

• Leche (traer)

• Reactivo de Molish

• Ácido sulfúrico concentrado

• Reactivo de Benedict

• Reactivo de Barfoed

• Pinzas para tubos de ensayos

• Alcohol amílico

• Ácido clorhídrico

• Hidróxido de sodio 1M

• gotero

PROCEDIMIENTO

Prueba de Molish: Se le Agregaron 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra que contenía carbohidratos (Leche). Luego se le añadió cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml de ácido sulfúrico concentrado, hasta que se formaron dos capas. Se observaron cualquier cambio de color en la interfase de los dos líquidos.

Prueba de Benedict: Se Tomaron 3 tubos de ensayo y se le agregó al primero 0.5 ml de solución de lactosa, al segundo 0.5 ml de solución de glucosa y al tercero 0.5 ml de solución de sacarosa. Se les Adicionó 0.5 ml del reactivo de Benedict a cada tubo y se colocaron en un baño de agua hirviendo por 3 min.

Prueba de Barfoed: Se tomaron 3 tubos de ensayo, se le adicionó al primero 0.5 ml de solución de galactosa, al segundo 0.5 ml de solución de ribosa y al tercero 0.5 ml  solución de almidón. Después se le adicionó 1 ml del reactivo de Barfoed a cada tubo, hirvieron por 2 min y se dejaron reposar.

Prueba Bial: Se tomaron 3 tubos de ensayo; luego se le adicionó al primero 0.5ml  de solución de ribosa, al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de almidón. Después se le adicionó 0.5 ml del reactivo de Bial a cada tubo y se calentaron hasta que empezó a hervir, se dejó enfriar y luego se le agregó 1 ml de alcohol amílico se procedió a agitar.

Prueba de Salliwanoff: Se tomaron 3 tubos de ensayo; Luego se le adicionó al primero 0.5ml  de solución de fructosa, al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de glucosa. Después se le Adicionó 1ml  del reactivo de  Selliwanoff a cada tubo. Se Calentó durante 1 min en un baño de agua hirviendo.

...