Inmunologia

INTRODUCCION

La respuesta inmune celular del hombre debe ser evaluada mediante pruebas de laboratorio, no sólo frente a la sospecha de estados inmunes alterados, sino también frente a tratamientos con modificadores biológicos de la respuesta y en eventuales estudios de vacunación. Frente a cualquiera de estas situaciones, la respuesta inmune celular puede ser evaluada tanto in vivo como in vitro. Las respuestas in vivo, se evalúan únicamente mediante pruebas cutáneas, llamadas reacciones de hipersensibilidad.

Por otro lado, un vasto arsenal de pruebas in vitro, están disponibles, para evaluar la respuesta celular y la factibilidad de su uso dependen tanto del nivel de equipamiento de cada laboratorio como de la formación de sus recursos humanos. No obstante, de manera general ningún ensayo aislado es suficiente para un adecuado diagnóstico; una visión adecuada del funcionamiento de la respuesta celular puede obtenerse por la combinación e interpretación de varios métodos y parámetros. Especial cuidado debe tenerse en el análisis, manejo e interpretación de los resultados.

Debe considerarse que los resultados obtenidos podrían variar dependiendo de la metodología empleada, del background genético de los diferentes individuos e incluso dentro de un mismo individuo. Por ello resulta de especial valor que cada laboratorio determine y maneje con propiedad los parámetros normales para cada prueba, pudiendo

Componentes celulares del S. I. innato:

• Células: Fagocitos y células citotóxicas

-Fagocitos:

-Macrófagos

-PMN neutrófilos

-Células asesinas naturales: NK

-Eosinófilos

-Linfocitos B-1 y linfocitos T intraepiteliales (γδ)

Principales métodos de laboratorio que evalúan componentes celulares R. I . I:

-CITOMETRIA DE FLUJO

-INMUNOHISTOQUIMICA

-INMUNOFLUORESCENCIA

-CULTIVO CELULAR

-QUIMIOTAXIS

-QUIMIOLUMINISCENCIA

-PRUEBA NBT (nitroazul de tetrazolio ):Test de funcionalidad del estallido respiratorio

PREPARACIÓN Y AISLAMIENTO DE DIFERENTES POBLACIONES CELULARES

El estudio de la respuesta inmune celular requiere, en algunos casos, disponer de poblaciones celulares puras o enriquecidas que permitan la evaluación de diferentes parámetros. Se puede utilizar métodos de purificación tradicionales y basados en separación inmunomagnética.

1.Métodos de purificación tradicionales

Utilizan soluciones de ficoll-hipaque o percoll en diferentes densidades, las que mediante centrifugación permiten la separación de las diferentes poblaciones celulares, basándose en sus diferencias de tamaño y densidad.

1.1. Separación de linfocitos

Para ello la sangre total es diluida en buffer fosfato salino en proporción 1:1,depositándola sobre ficoll-hipaque a densidad de 1,077. Luego de centrifugar, en la interfase entre el plasma diluido y la solución de ficoll, se forma un anillo blanco rico en leucocitos, mientras que en el pellet se encuentran los eritrocitos y los polimorfonucleares (PMN).

1.2. Separación de PMN y linfocitos

La sangre heparinizada se mezcla con una solución de dextrano al 6% y se deja sedimentar a temperatura ambiente. De esta manera, se obtiene un plasma rico en PMN, monocitos y linfocitos pero libre de eritrocitos (figura 41-1).

1.3. Separación de linfocitos y PMN

Una buena separación de linfocitos y PMN se consigue a partir del plasma obtenido por sedimentación con dextrano al 6%. Esta se obtiene mediante centrifugación diferencial sobre ficollhipaque con densidad 1,077, observándose en la interfase un anillo blanco que contiene los linfocitos

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