La cromatografía de tamizado molecular

INDICE

I. INTRODUCCIÓN 3

II. OBJETIVOS 3

III. REVISIÓN LITERARIA 4

METODO CIE PARA LA DETERMINACION DEL COLOR EN VINOS 5

METODO DE LOS 10 ORDINALES PARA LA DETERMINACION DEL COLOR EN VINOS 5

Vino: 5

IV. MATERIAL Y MÉTODOS 7

a. MATERIALES 7

V. PROCEDIMIENTO 8

a. PROCEDIMIENTO: METODO CIE PARA DETERMINACION DEL COLOR EN VINOS 8

b. PROCEDIMIENTO: MÉTODO DE LOS 10 ORDINALES PARALA DETERMINACIÓN DEL COLOR EN VINOS 9

VI. CALCULO 10

a. CALCULO DE METODO CIE PARA DETERMINACION DEL COLOR EN VINOS 10

b. CALCULO MÉTODO DE LOS 10 ORDINALES PARALA DETERMINACIÓN DEL COLOR EN VINOS. 12

VII. RESULTADOS 14

VIII. DISCUSIONES 14

IX. CONCLUSIONES 15

X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 15

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son una clase muy diversificada de biomoléculas. Las diferencias en sus propiedades químicas, tales como la carga, grupos funcionales, forma, tamaño y solubilidad, les permitan realizar muchas funciones biológicas. Estas funciones incluyen la catálisis enzimática, la regulación metabólica, la unión y el transporte de moléculas pequeñas, la regulación génica, la defensa inmunológica y la estructura celular. La determinación del peso molecular de una proteína es de importancia fundamental para su caracterización bioquímica.

La cromatografía de tamizado molecular no es destructiva y las muestras separadas pueden ser utilizadas para otro tipo de cromatografía o análisis.

La cromatografía de tamizado molecular permite separar moléculas atendiendo a su tamaño y, por consiguiente, su peso molecular es aplicable fundamentalmente a moléculas cuya forma hidrodinámica se comporta como una esfera o elipse (proteínas globulares por ejemplo).

La fase estacionaria del cromatograma consiste en geles hidrofílicos insolubles en agua que forman partículas huecas esféricas con un diámetro controlado y son intersectadas por muchos poros de diámetro uniforme: las diferentes resinas utilizadas en este tipo de cromatografía tienen diferentes capacidades de separación (La capacidad de separar moléculas de diferentes tamaños), que de nuevo depende del diámetro de la partícula de gel y del diámetro de los poros que presenta.

Al analizar muestras con moléculas de diferentes tamaños, si se selecciona correctamente la resina de filtro, puede haber algunas moléculas cuyo tamaño les impida penetrar en los poros del grano, por lo que solo pueden moverse fuera de la resina. Por el contrario, las moléculas cuyo tamaño les permita penetrar los poros del gel serán retenidas y retrasadas desde el frente.

Como resultado, la molécula más grande saldrá primero de la columna, y la última molécula en salir será la más pequeña.

Las diferentes resinas comerciales, además de su capacidad de resolución, también se diferencian por sus propiedades químicas, por lo que existen resinas de origen natural (polisacárido o dextrano), como Sephadex, y resinas de origen sintético (gel de poliacrilamida), como Biogel P e híbrido (glucano reticulado con poliacrilamida), como Sephacryl.

En esta práctica, usaremos Sephacryl S-200 como resina de filtro con una capacidad de separación de 4 a 200 kDa de peso molecular.

OBJETIVOS

Familiarizar al estudiante con las técnicas de cromatografía de filtración molecular.

Localización de las macromoléculas y cálculo de masa aproximada de una proteína problema.

REVISIÓN LITERARIA

PROTEÍNAS

Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Pueden contener además azufre y en algunos tipos de proteínas fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Las proteínas difieren de las grasas y carbohidratos, por contener nitrógeno (aproximadamente 16%), esta proporciona un medio útil para medir la cantidad de proteínas de un alimento (Lehninger, 1989).

Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los animales. El término proteína deriva del griego proteicos, que significa primero (Primo, 1995).

La unión de un bajo número de aminoácidos da lugar a un péptido; si el número de aminoácidos que forma la molécula no es mayor de 10, se denomina oligopéptido, si es superior a 10 se llama polipéptido y si el número es superior a 50 aminoácidos corresponde a una proteína. Son muy complejas, son las más abundantes, después del H2O. Son moléculas 9 específicas y que marcarán la individualidad de cada ser vivo, expresando la información genética (Fennema, 2000).

Aminoácidos:

Son sustancias cristalinas. Estos se caracterizan por poseer un grupo carboxilo (-COOH) y uno amino (-NH2). Los aminoácidos son las unidades elementales constitutivas de las moléculas denominadas proteínas. Se sabe que de los 20 aminoácidos proteicos conocidos, 8 resultan indispensables (esenciales) para la vida humana y 2 son "semiindispensables". Son estos 10 aminoácidos los que requieren ser incorporados al organismo en su cotidiana alimentación y con más razón en los momentos en que el organismo más los necesita: en la disfunción o enfermedad (Braverman, 1967).

PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

En una célula hay muchas proteínas. Para estudiar las propiedades de cualquier proteína es preciso contar con muestra homogénea que solo contenga moléculas de un tipo. La separación y aislamiento (purificación) de proteínas constituye el primer paso indispensable para experimentos ulteriores. En general, las técnicas de separación se concentran en el tamaño, la carga y la polaridad, que es donde residen las diferencias entre moléculas. Se aplican muchas técnicas para eliminar contaminantes y lograr una muestra pura de las proteínas de interés. Para purificar una proteína es imprescindible tener un método para detectar cuantitativamente su presencia. Es deseable que este método sea específico y fácil de llevar a cabo. En este sentido es mucho más cómodo trabajar con enzimas, pues se detectarían mediante su ensayo de actividad, en caso de purificar proteínas no enzimáticas, se requieren métodos de selección más específicos. (García, 2001). Existen varios métodos de purificación de proteínas entre ellos tenemos:

Métodos cromatográficos para separación de proteínas: La cromatografía es un método ampliamente desarrollado

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