Lab Bioquimica

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA N° 3

PROPIEDADES IÓNICAS DE LOS AMINOÁCIDOS

OBJETIVO:

Demostrar las propiedades ácido-base de los aminoácidos.

FUNDAMENTO:

Todos los aminoácidos son anfolitos los cuales contienen al menos un grupo funcional acídico (carboxilo) y uno básico (a-amino). Algunos aminoácidos contienen otros grupos que se ionizan fácilmente: grupos amino, carboxilo, phidroxifenilo, sulfihidrilo, guanidino e imidazol. El carácter iónico de los polipéptidos y las proteínas es en gran parte debido a estos grupos adicionales ionizables debido a que los grupo alfa-amino y carboxilo de los aminoácidos participan en los enlaces peptídicos. En esta práctica se estudia la reacción de aminoácidos cuando se adiciona un ácido o una base y se observa el cambio de pH. Además, después de cada adición de ácido o base durante una titulación, los resultados se pueden predecir por el uso de la ecuación general de Henderson-Hasselbalch.

MATERIALES Y REACTIVOS

Muestras de aminoácidos en polvo, NaOH 1N, HCl 1N, amortiguadores estándar. Balanza analítica, pH metro, barra y agitador magnético, bureta, pinzas para bureta, soporte, espátula, 8 vasos de precipitados de 100 ml, embudo.

PROCEDIMIENTO

Titulación de aminoácidos desconocidos.

Pesar cerca de 400 mg de muestra y disolverla en 20 ml de H2O en un vaso de precipitado. Introducir una barra magnética y colocarlo en una placa de agitación, así como el electrodo para medir pH. Titular la muestra disuelta desconocida con HCl 1N, registrando las lecturas de la bureta y el pH a intervalos frecuentes (cada 0,5 mL) hasta que la solución alcance un pH de 1.0. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulación. Titular otros 20 ml de agua (blanco) con HCl 1N, gota a gota en las primeras 10 gotas y de dos en dos gotas las siguientes 10 gotas. Finalmente de cuatro en cuatro gotas hasta que la solución alcance pH de 1.0 Registrar el pH y el volumen del ácido después de cada adición. Disolver otra muestra (otra vez aproximadamente 400 mg en 20 ml de agua) y titular la muestra con NaOH 1N de la misma manera que para la titulación con ácido hasta que el pH de la solución llegue a 12. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulación. También titular a 20 ml de agua (blanco) con NaOH 1N hasta pH 12.0 de manera similar que el primer blanco.

REPORTE

Hacer una tabla de resultados para cada titulación:

• Muestra con NaOH, Agua con NaOH, Muestra con HCl, Agua con HCl.

• Dibujar la curva de titulación verdadera siguiendo el siguiente procedimiento: Para determinar la curva de titulación verdadera de cualquier sustancia, se debe medir cuánto ácido o base se consume al titular el solvente (agua) en cada pH y entonces restar esta cantidad de la cantidad total de ácido o base consumida para alcanzar ese pH.

• Determinar la capacidad amortiguadora del o los aminoácidos.

Titulación del lado ácido. Construcción de la gráfica

El siguiente ejemplo con el lado ácido de la titulación de un aminoácido ilustra uno de varios de los métodos disponibles para corregir por dilución. Para la muestra y el blanco de agua, graficar el volumen del ácido adicionado contra el pH alcanzado (Fig. 1). De la gráfica o de los datos originales, preparar una tabla como la Tabla 1. Restar el volumen del ácido requerido para llevar el blanco de agua a cualquier pH del volumen del ácido requerido para llevar la muestra al mismo pH. La diferencia representa la cantidad de ácido consumida en la titulación de la muestra solamente. Usando los datos de su tabla, graficar el pH contra el número de equivalentes de ácido necesario para titular la muestra del aminoácido a cualquier pH (ver Fig. 2).

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