Laboratorio en enfermedades infecciosas

Universidad Autónoma de Baja California

Escuela de Ciencias de la salud

Infectologia

Maestro:

Dr. Jorge Field

Alumna:

Vanessa Daniela Castillo León

Clínica:

801

Tema:

El laboratorio en el diagnóstico

de enfermedades infecciosas

El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

Para el diagnóstico de enfermedades infecciosas se requiere el empleo de procedimientos con los cuales se pueda conocer el agente etiológico involucrado.

TINCIONES

La tinción Gram es la más utilizada de las tinciones, permite agrupar las bacterias de acuerdo con la estructura y grosor de su pared en dos grandes grupos bacterianos: bacterias grampositivas (resisten la decoloración con etanol/acetona) y gramnegativas, que en conjunto con la morfología bacteriana (coco o bacilo) permiten al clínico una orientación inicial, sumada a los hallazgos clínicos e información epidemiológica.

Cuando se sospecha la presencia de micobacterias o Nocardia se puede utilizar la tinción alcohol-ácida que utiliza carbol-fucsina y azul de metileno como colorantes. En la tinción de Ziehl-Neelsen la tinción primaria con carbolfucsina requiere que la laminilla sea calentada, mientras que en la técnica de Kinyoun no se requiere que la laminilla sea calentada con el c a rb o l-fu csin a, recomendándose incrementar la concentración de este colorante. Algunos laboratorios han substituido la técnica de Ziehl-Neelsen por la de Kinyoun.

PRUEBAS RAPIDAS PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS Y ANTIGENOS

Existen dos variantes de la técnica de inmunofluorescencia  una directa y otra indirecta. La IF directa es utilizada para detectar antígeno y la indirecta tanto antígeno como anticuerpos. La muestra clínica se coloca en una laminilla que es secada al aire y fijada con alcohol-acetona o metanol, se cubre la laminilla con un conjugado del anticuerpo unido a fluoresceína, se enjuaga la laminilla, se seca al aire y es observada posteriormente en microscopio de luz ultravioleta.

En la IF indirecta la muestra clínica en la laminilla se cubre con el anticuerpo específico y en un segundo paso se agrega un anticuerpo unido a fluoresceína específico contra el primer anticuerpo.

CULTIVOS

Para el aislamiento de los microorganismos se utilizan diversos medios de cultivo (líquidos, sólidos) o líneas celulares que permiten el crecimiento de microorganismos intraceluares (ej. Chlamydiá). Dependiendo del sitio anatómico donde se sospeche que existe la infección, será el tipo de muestra a tomar. A continuación se describen aquellas que son más utilizadas.

Hemocultivo

En diversas enfermedades se producen bacteremias, las cuales pueden ser continuas, transitorias o intermitentes, por lo cual se requiere de la toma de varias muestras de sangre.

Es importante que las muestras sanguíneas sean tomadas antes del inicio de los antibióticos siempre que sea posible, se requiere un mínimo de 2 a 3 muestras para que las posibilidades de recuperación bacteriana sean mayores (85 a 90%). Cuando se conoce, es recomendable tomar la muestra lo más cerca al período de la bacteremia. El volumen de sangre requerido es variable dependiendo del medio de cultivo utilizado; en general se recomienda obtener de 5 a 10 ml en adultos y de 1 a 2 ml de sangre en niños, volúmenes más pequeños se han evaluado en recién nacidos manteniendo siempre la proporción sangre: medio de 1:10.

Las muestras sanguíneas pueden ser inoculadas en medios de cultivo enriquecidos y suplementados y que contengan un anticoagulante.

Mielocultivo

En enfermedades como brucelosis, fiebre tifoidea, etc. la recuperación bacteriana es mejor cuando se realiza cultivo de aspirado de médula ósea. Habitualmente se recomienda puncionar a nivel de la espina ilíaca posterior. Se utiliza una aguja para aspirado de médula ósea, el procedimiento de asepsia y antisepsia es semejante al descrito para hemocultivo. Una vez obtenida la muestra de aspirado de médula ósea deberá inocularse en frascos destinados para hemocultivos. El procedimiento de incubación en el laboratorio es semejante al descrito para hemocultivos. En caso de sospecha de algunas bacterias de crecimiento lento se recomienda mantener los frascos o tubos en incubación por 14 a 21 días, realizando resiembras periódicas (cada semana).

Cultivo de líquido cefalorraquídeo

La toma de la muestra debe ser realizada por personal experimentado. El procedimiento se realiza con el paciente en decúbito lateral o sentado, con flexión de la cabeza y los muslos hacia el tórax. Se efectúa el aseo de la región lumbosacra utilizando soluciones iodadas (Isodine), limpiando el exceso con gasa estéril del sitio donde se va a puncionar. Se coloca un campo hendido y se realiza la punción con aguja (para raquianestesia) a nivel de L4-L5.

Se debe obtener un volumen aproximado de 3 a 5 mi el cual debe ser fraccionado en varios tubos, enviando una muestra a realización de citoquímico y citológico, una muestra para coaglutinación o aglutinación con látex y una muestra para cultivo.

Urocultivo

Existen básicamente cuatro formas de tomar la muestra de orina: muestra de chorro medio, con sonda transuretral, por punción suprapúbica y con bolsa colectora. Por la confiabilidad de resultados al evitar la contaminación con microorganismos periuretrales o perineales, la forma ideal es por punción suprapúbica, sin embargo, ésta es una técnica traumática. En los pacientes que pueden colaborar se realiza con mayor facilidad la toma de muestra de chorro medio, que consiste en permitir que se inicie la micción (para arrastrar mecánicamente los gérmenes que pudiera haber a nivel uretral) y tomar la muestra de orina a la mitad de la micción. En los niños pequeños o personas que no puedan colaborar la toma debe realizarse usando una sonda. La técnica con bolsa colectora es la más utilizada en la mayoría de hospitales y laboratorios, tiene la desventaja de que se produzca contaminación con gérmenes que colonizan el área perineal. Cuando se utilizan bolsas colectoras se sugiere cambiar cada hora la bolsa hasta obtener la muestra para disminuir el riesgo mencionado. Independientemente de cómo sea tomada la muestra, en todos los casos se debe

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