Microbiological I

TALLER-PARCIAL.

1) Describa con detalle el ciclo que se presenta a continuación

2) Diseñe un vector de clonación que le permita producir insulina recombinante en masa. Explique el modelo, como lo haría y como purificaría la proteína.

3) Defina y describa las principales características de los protozoarios, mencione un individuo del reino y describa su importancia biológica o patológica.

4) Explique porque los pacientes son SIDA mueren a causa de enfermedades oportunistas (describa toda la inmunopatologia que conlleva a la perdida de linfocitos CD4 y como esto se relaciona con las enfermedades oportunistas)

Solución taller.

1. Descripción de etapas.

a) Adsorción: Alta especificidad medida por receptores, es decir, el virus solo puede adherirse o pegarse a las células que tengan su mismo receptor.

b) Penetración: aquí el virus que ya se pegó a la célula pasa a ingresar su genoma vírico y proteínas a la célula colonizada, este proceso es dependiente de energía y temperatura, este proceso es realizado mediante endocitosis mediada por receptores.

c) Replicación: esta etapa ocurre en el citoplasma o en el núcleo, aquí hay producción de ac.nucleicos y proteínas virales Mecanismos que ocurren después de la penetración para liberar el genoma viral y que este pueda codificar las proteínas necesarias para ejercer sus funciones. La forma de replicación del genoma viral depende del tipo de material genético de la célula huésped, es decir, si contiene ARN o ADN y si es simple o de doble cadena.

d) Encapcidación: Las proteínas de la envoltura (cápsido, vaina, fibras, etc.) son proteínas tardías que se sintetizan después de iniciada la replicación del material genético.

e) Ensamblaje: Todas las proteínas de la envoltura se ensamblan para formar una partícula viral capaz de infectar a otra célula cuando sea liberada.

f) Libración: se puede dar mediante: lisis, gemación o expulsión; esto depende a tipo de virus que tenga, es decir, si es un virus desnudo o un virus envuelto.

Virus desnudo: Ensamble y maduración en el citoplasma y se da mediante liberación o lisis.

Virus envuelto: toman envoltura de una membrana de la célula (Citoplasmática o nuclear), se liberan por gemación (generalmente) se ensamblan en la membrana de la que toman la envoltura y pueden madurar extracelularmente.

2. Modelo de clonación:

Tomamos el gen de la insulina de un ser humano que no presente problemas en esta, luego de aquí pasamos a cortar las cadenas de polipeptidos (A Y B) por medio de bases que codificaran para cada una de las cadenas (hay 63 para la cadena A y 93 para la cadena B) luego de tenerlas separadas se procede a sembrarla en cultivos diferentes pero se le insertan estas expresiones génicas (A Y B ya separadas y en cultivos distintos) a un promotor adecuado y este sería la E.coli para que estos dos fragmentos de insulina se sintetizan como parte de una proteína de fusión(se crea al unir partes de dos genes diferentes), ya que esta proteína de fusión es más estable en E.coli que en la propia insulina, luego para recuperar la insulina de la bacteria pasaríamos a utilizar bromuro de cianógeno que corta específicamente las cadenas polipeptidicas por los residuos de metionina, lo que permite la recuperación de la insulina, una vez que la proteína de fusión se ha aislado de la bacteria( la insulina por sí misma no contiene metionina por lo que no se vería afectada con bromuro de cianógeno) de esta manera estamos purificando la proteína. Cuando la insulina se produce mediante los péptidos separados A Y B cada una de las proteínas de fusión se aíslan de un cultivo bacteriano independientes y las cadenas se separan mediante el corte con bromuro de cianógeno. Las cadenas cortadas se van a conectar con el uso de un tratamiento químico que da lugar a la formación de enlaces disulfuro, finalmente se produce insulina humana de forma biosintetica , que resulta ser exactamente igual a la producida por el páncreas.

3. Características de los protozoarios.

Son organismos unicelulares cuya unidad es una célula eucariota que tiene toda la capacidad para cumplir funciones requeridas para asegurar la continuidad de la especie. Tienen todo tipo de simbiosis, es decir, mutualismo-comensalismo-parasitismo.

Características de los protozoarios:

• LOCOMOCION: su locomoción se da mediante flagelos, cilios, pseudópodos

-flagelos: Apéndices filamentosos helicoidales formados por cuerpo basal, gancho y flagelina (filamento externo). Hay diferentes tipos de flagelos: monotrico-lofotrico-anfitrico-peritrico.

-cilios: Los cilios trabajan como remos, es decir, con golpes alternantes de fuerza y recuperación, tienen motilidad hacia adelante y hacia atrás que desplaza la célula en una dirección perpendicular al eje del cilio. Los cilios cubren la superficie del protozoario.

-pseudópodos: son extensiones temporeas del citoplasma, están presentes generalmente en amebas, son importantes porque sirven o ayudan a capturar el alimento. Los pseudópodos se extienden y se contraen por medio del ensamblaje reversible de las subunidades de actina en microfilamentos que forman redes que convierten al citosol en gel. Hay diferentes tipos de pseudópodos y son:

*Lobopodios= son gruesos y cortas, su terminación es redonda con ectoplasma (citoplasma periférico, de aspecto hialino y estructura coloidal de gel) y endoplasma (citoplasma central, de aspecto granular y estructura coloidal de sol). Típicos de Amoebozoa.

*Filopodios= más finos y con los extremos terminados en punta, consistiendo principalmente en ectoplasma. Estas formaciones se apoyan en microfilamentos.

*Reticulopodios= también conocidos como pseudópodos reticulados, en donde los finos pseudópodos individuales se amontonan entre sí y forman una red irregular en el exterior del protozoo. Se presentan en los foraminíferos.

*Axopodios= son seudópodos finos, largos y rígidos. Contienen complejos grupos de microtúbulos envueltos por citoplasma. Se observan en radiolarios y en heliozoos.

-sésiles: Se refiere a un organismo acuático que crece adherido, agarrado o arraigado en su sustrato, del que no se separa y sobre el que no se desplaza. Muchos organismos del bentos son sésiles. Como ejemplos tenemos las esponjas, los corales, algunos moluscos bivalvos, como las ostras o los mejillones (pero

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