Propiedades químicas de aminoácidos y proteínas
SOFIA LOPEZ GARCESPráctica o problema12 de Abril de 2023
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PROPIEDADES QUÍMICAS DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
Nombre estudiante : Maria Isabel Higuita Usuga
Documento de identidad 1.023.624.751
Nombre estudiante: Sofia Lopez Garces
Documento de identidad 1.000.759.791
1. Objetivos.
1. Reconocer los aminoácidos y las proteínas utilizando los reactivos de la ninhidrina y de Biuret,
respectivamente.
2. Realizar con la solución de albúmina el siguiente ensayo:
a. Pruebas de precipitación con cationes.
3. Determinar el punto isoeléctrico de la caseína.
4. Identificar la presencia de núcleos aromáticos en las proteínas (reacción xantoprotéica).
5. Identificar la presencia de tirosina, triptófano y aminoácidos azufrados en las proteínas.
2. Observaciones y datos.
PUNTO ISOELÉCTRICO
Leche (caseína) | Se evidenció que después de añadir de 20 - 25 gotas de ácido acético, la leche se separó en cuajada, de tal forma que lo que se evidencia aquí es la caseína. Su punto isoeléctrico fue de 5. |
PRECIPITACIÓN
Leche + nitrato de plata al 2 % | Separación de las proteínas, se evidencia que se cuajo la leche. En las paredes del tubo de ensayo se nota textura. (Caseína) |
Leche + acetato de plomo | Se ve que se separaron los compuestos que conforman al acetato de plomo, ya que se evidencia dos estados, uno sólido y otro líquido. |
Leche + sulfato de cobre | Se ve que se separaron los compuestos que conforman al sulfato de cobre, ya que se evidencia dos estados, uno sólido y otro líquido. Además hubo una coloración verdosa. En las paredes del tubo de ensayo se nota la textura del sólido, “cuajo”. |
Albúmina | Se ve que se separaron los compuestos que conforman a la albúmina, ya que se evidencia dos estados, uno sólido y otro líquido. Pero el sólido queda en el fondo del tubo de ensayo, se puede deducir que tiene una textura “viscosa”. |
Albúmina + acetato de plomo | Se evidencia que la separación no es tan evidente, porque se encuentra menos sólido, está con una coloración blanca - transparente, con una textura “viscosa”. |
Albúmina + sulfato de cobre | Se ve que está en líquido, pero con una coloración verdosa. |
NINHIDRINA
Glicina | Antes del baño María: Se nota que la glicina tiene una coloración violeta después de agregar la ninhidrina. Después del baño María: Se nota un color morado - azul oscuro. |
Leche | Antes del baño María: Se nota que la leche se precipitó, ya que evidencia una textura de cuajo, esto sucedió después de agregar la ninhidrina. Después del baño María: Se nota que la leche tomó un color morado claro, y cambió su estado a líquido. |
Albúmina | Antes del baño María: Se nota que hay un color amarillo con una textura viscosa, esto sucedió después de agregar la ninhidrina. Después del baño María: Se nota que su color cambió a tonalidad morada y su estado es sólido por completo. |
REACCIÓN XANTOPROTÉICA
Glicina | HNO₃: Hubo una reacción “exotérmica”, podemos deducir esto porque el tubo de ensayo presentó características de este tipo de reacciones, por otro lado, no hubo cambio de color. HNO₃ + baño María: No hubo cambio de color. Gotas de hidróxido de sodio: No hubo cambio de color. |
Leche | HNO₃: Se precipitó y tomó una coloración amarilla. HNO₃ + baño María: Su coloración siguió igual, pero su estado se volvió líquido. Gotas de hidróxido de sodio: Hubo cambio de color, pasó de amarillo a naranjado. |
Albúmina | HNO₃: Se volvió espesa y de una coloración amarilla. HNO₃ + baño María: Su coloración siguió igual, pero hubo precipitación. Gotas de hidróxido de sodio: Hubo cambio de color. pasó de amarillo a naranjado. |
PRUEBA DE BIURET
Glicina + hidróxido de sodio | Se evidencia una tonalidad azul clara, pero después de un rato, se volvió transparente. |
Leche + hidróxido de sodio | Se evidencia una tonalidad violeta (clara), su estado no cambia. |
Albúmina + hidróxido de sodio | Se evidencia una tonalidad violeta (clara) |
3 - 4. Cálculos, resultados y análisis.
Punto Isoeléctrico: Las proteínas y los aminoácidos son compuestos anfóteros, pueden reaccionar en medio ácido o básico. Existe un pH en cual la carga neta es igual a cero y la proteína no se desplaza en el campo eléctrico, ese valor de pH se conoce como punto isoeléctrico (P.I)
La caseína, es la principal proteína encontrada en la leche y se puede separar ajustando el pH en el P.I de la caseína.
- En el punto isoeléctrico en cuanto a la leche, lo que vamos a estar indagando es la proteína “caseína”. El pH obtenido de la caseína dio un resultado alrededor de 5, del cual podemos deducir que presenta menos solubilidad. Aquí hubo una desnaturalización ya que cambia completamente el estado de la leche como se tenía principalmente.
Precipitación: A un pH de 7 y por encima de él, las proteínas están normalmente cargadas negativamente, así que la adición de cationes metálicos neutralizan la carga y la proteína se precipita. La precipitación por iones de metales pesados, como son: Hg2+, Pb2+ ó Ag+, es, por lo tanto, más efectiva a valores de pH neutros o ligeramente alcalinos, pero la solución no puede ser muy alcalina, por que se corre el riesgo de que se precipitan hidróxidos de los metales.
- En la precipitación se observaron los cambios, ya que el pH fue cambiado al añadir un ácido o una base, de tal forma que para que la proteína se precipitara tuvo que haber estado en un pH de 7 o por encima de él. En cada uno de los procesos realizados se evidenció la separación entre un líquido y sólido, además de un cambio de color que fue debido al cobre.
Reacción de Ninhidrina: La ninhidrina, (hidrato de tricetohidrindeno) un agente oxidante, reacciona con los α-aminoácidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color azul-púrpura. Esta reacción se efectúa también con aminas primarias y amoníaco pero sin desprendimiento de CO2. Los aminoácidos: prolina e hidroxiprolina, también reaccionan con la ninhidrina, pero en este caso se obtiene un color amarillo.
- En el proceso de la ninhidrina, se esperaba que para que la reacción sea positiva tenga una coloración violeta por el grupo -NH₂ libre. En la glicina, se evidenció un color morado al añadir la ninhidrina, lo cual nos da a deducir que estaba en el pH adecuado. Por otro lado, con la albúmina, al añadir la ninhidrina se obtuvo un color amarillo, por lo cual nos da a deducir que este tiene aminoácidos prolina e hidroxiprolina, que son los que reaccionan con la ninhidrina para obtener este color.
Al calentar los tres tubos de ensayo (glicina, leche y albúmina), obtuvimos el color que se esperaba para que la reacción fuera positiva (violeta), y de tal forma se puede deducir que el pH cambió debido al aumento de temperatura.
Reacción Xantoprotéica: El ácido nítrico concentrado reacciona con algunas proteínas que contengan en su estructura aminoácidos con anillos aromáticos, dando un color amarillo que se oscurece hasta anaranjado cuando se añade un álcali. Esta reacción es positiva para las proteínas que contienen fenilalanina, tirosina o triptófano.
- Se esperaba que hubiera una reacción positiva (cambio de color por los anillos aromáticos). En la leche y albúmina, si hay anillos aromáticos, por los cual: Principalmente si hubo un color amarillo, que es debido a esos anillos y después de añadir las gotas de hidróxido de sodio hubo cambio a naranja, esto se dio ya que al añadir un alcali se esperaba está reacción.
Pero, en la glicina no sucedió nada debido a que ella no contaba con anillos aromáticos, de tal forma que quedó del mismo color, transparente.
Prueba de Biuret: Las proteínas, proteasas y peptonas, dan positiva esta prueba. A medida que progresa la hidrólisis de una proteína, el color producido en la prueba de Biuret se decolora gradualmente a rosa y después desaparece ya que los péptidos más pequeños y los aminoácidos no dan la coloración.
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