Práctica: Extracción de glucósidos antracenicos

Información de la Planta en Estudio (revisión de constituyentes químicos y de actividad farmacológica, usos populares y/o clínicos…) (max. 1 página)

Genista monspessulana: Nombre común rematilla. Hace parte de la subfamilia Faboideae y a su vez de la familia Fabaceae. Dependiendo el lugar de su cultivo se ha implementado en diferentes que haceres, por ejemplo en Europa se utiliza principalmente como hortaliza, por el contrario, en América se utiliza como cerca viva o en jardinería ya que posee una extensa floración entre el invierno y primavera.

Este tipo de plantas poseen efectos farmacológicos basados en una actividad antioxidantes, a su vez, tiene propiedades fitoestrogénicas, lo que le confiere un uso en terapias de prevención.

• Constituyentes Químicos: En la familia Fabaceae se han descrito en gran cantidad diferentes tipos de metabolitos secundarios, entre ellos están los flavonoides, glucósidos, cianogénicos, péptidos, fenólicos y terpenoides. Ahora bien, centrándonos netamente en el género Genista se puede decir que podemos encontrar, dentro de las plantas de este género, metabolitos como terpenos, flavonoides, isoflavonas, fenoles, glucósidos, alcaloides y ácidos grasos. Así como en toda la familia Fabaceae el género Genista tiene en mayor cantidad Alcaloides como metabolitos secundarios, siendo estos los que se encuentran principalmente. Existe un problema con todos estos metabolitos encontrados en las plantas de este género, aún no se conoce cuáles son las funciones de estos dentro del metabolismo de las plantas de este mismo género.

Características Estructurales del Grupo de Metabolitos Secundarios(dibujar estructuras

ACD/ChemSketch, versión gratis disponible o similar)

Un glucósido antracenico es básicamente una antraquinona glicosilada.

[pic 1]

Ahora bien, ¿qué es una antraquinona? Básicamente son compuestos aromáticos polihidroxilados. Estas moléculas también pueden estar glicosiladas.

[pic 2]

Dependiendo de los lugares en donde se encuentren los grupos funcionales en este tipo de moléculas, estas pueden llegar a poseer diferentes actividades farmacológicas. Un ejemplo de esto es que si poseen grupos OH en la posición 1 y 2 tienen propiedades colorantes, por el contrario si están en el 1 y 8 poseen efectos laxantes.

[pic 3]

Resultados

Resultados de Pruebas de Tubo*

*Incluir imagen (es) de los resultados.

** Utilizar las líneas que considere necesario, según el número de pruebas de tubo realizadas.

Resultados de Cromatografía en Capa Delgada

Condiciones cromatográficas

Fase estacionaria: Silice gel G

Fase móvil: Tolueno-acetato de etilo-ácido acético (75:24:1)

Agentes Reveladores: KOH (10%)

Cromatofolio (cromatograma)

[pic 8][pic 9]

Imagen N°5. Derecha: Cromatografía en capa delgada-Izquierda: Cromatografía en u.v 312nm. (S: Muestra patrón (Hojas de sen). / P: muestra problema (Genista monspessulana).)

X: Distancia del punto de siembra a frente de solvente

A, B, C, D: Distancia recorrida por compuestos del extracto de Hojas de sen.

E, F, G, H: Distancia recorrida por compuestos del extracto de Genista monspessulana (muestra problema).

Tabla de Factores de Retención (Rf)*

Tabla N°1. Factores de retención de la muestra patrón y problema

Análisis de resultados (max. 2 páginas)

Primero que todo debemos decir que en todas las imágenes donde aparecen dos tubos de ensayo, el tubo de ensayo de la derecha es aquel al que se le realizaron los diferentes procesos, los de la izquierda fueron aquellos que se tomaron como patrón para las diferentes muestras.

Se observó a simples rasgos que las hojas de sen dieron positivo para la presencia de glucósidos antracenos con la reacción de Borntrager-Kraus.

Lo que se hizo con cada una de las muestras vegetales fue  realizar la reacción de Borntrager y así miso a cada una se le realizo la modificación de Kraus, en donde se agrega en primera instancia Acido Sulfúrico y seguido a esto Peróxido de hidrogeno, para luego calentar por 10 minutos y finalmente agregar una base fuerte, en este caso NaOH.

En las hojas de sen en los dos casos se obtuvo una coloración rosada-roja lo que determino la presencia de glucósidos antracenicos. El tubo de ensayo donde se realizó el procedimiento modificado por Kraus arrojó, aún, un color más rojo que el anterior, debido a que en este proceso se realiza una hidrolisis seguida por una oxidación lo que permite que todas aquellas antraquinonas que se encuentren glicosiladas puedan pasar a estar libre y así poder medir estas más fácilmente en la prueba de identificación.

Ahora bien, para hablar de la rematilla, con la prueba de Borntrager y con la modificación hecha por Kraus podemos demostrar aquello que ya habíamos expuesto en la sección de los metabolitos secundarios presentes en la planta, la Genista monspessulana no posee en sí compuestos antraquinonicos, por esta razón ninguna de las dos pruebas se tiñó de rojo o por lo menos de un rosado tenue. Es necesario esperar a hacer las siguientes prácticas de identificación para identificar todas aquellos metabolitos que están presentes dentro de esta muestra.

Para la parte de identificación de glicósidos antracenicos mediante el uso de cromatografía en capa delgada (CCD) se llevó a cabo una siembra de las soluciones obtenidas de Genista monspessulana y de la hoja de sen en silice gel G, la cual es considerada como una fase estacionaria de amplio espectro, contando con diferentes tamaños de partícula, esto implica un buen movimiento de los componentes a lo largo de la placa sin generar abultamientos de compuestos o falsos positivos, utilizando también una fase móvil compuesta por tolueno - acetato de etilo - ácido acético (75:24:1). En la cual se evidencio claramente sin la necesidad de revelar con KOH (10%) la presencia de estos metabolitos en la muestra de hojas de sen (imgx), debido a que se observaron unas manchas de coloración anaranjada las cuales se intensificaron a un color rojizo después del revelado.

Esto ocurre gracias al hecho de que la base aplicada a los compuestos antracenicos está presente de manera neutra lo cual facilita retirar protones de grupos hidroxilos, llevando a un aumento del flujo eléctrico dado que la estructura queda con carga negativa, este aumento también es consecuente a la resonancia que presenta esta molécula. Al realizar la observación de la placa bajo luz ultravioleta era posible ver las manchas que indicaban la presencia de compuestos como las antraquinos  que interrumpían la continuidad de la sílice gel quedando en estas posiciones de la placa cromatografía debido a su baja polaridad y por ende a una afinidad intermedia con esta.

Caso contrario paso con la siembra de la muestra problema, la cual solo hasta el momento de ser revelada con KOH presento una variación de color muy baja, indicando la presencia de algún compuesto, que se verifico al momento de observar la placa bajo la luz ultravioleta (ver imagen N°5), dando a pensar que se pueden tratar de glicosidos antracenicos, ya que aparte de esto también poseen factores de retención similares a la muestra patrón (hoja de sen) como se puede ver en la tabla N°1. Sin embargo no necesariamente podría ser un glicosido antrasenico dado a la coloración presentada, si no que se tratase de un compuesto con una solubilidad y/o polaridad similar. También se debe tener en cuenta que con la reacción de Borntrager-Kraus, se pueden generar compuestos de tipo quinonicos debido a la oxidación  que se presenta con el H2O2, los cuales se podrían observar en la placa cromatografica, después del revelado o con la luz ultravioleta.

Análisis de resultados (max. 2 páginas)

Referencias bibliográficas- citar de acuerdo a Revista Colombiana de Ciencias Químico Farmacéuticas (mínimo 2 libros y 2 artículos científicos)