Reacciones De Precipitacion

1. OBJETIVOS:

• Llevar a cabo algunas reacciones que permiten a través de una coloración especifica el reconocimiento de algunos aminoácidos

• Reconocer mediante reacciones de precipitación la desnaturalización de proteínas

2. FUNDAMENTO TEORICO:

Cuando la proteína no ha sufrido ningún cambio en su interacción con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa (Figura inferior). Se llama desnaturalización de las proteínas a lapérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.

Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitará la agregación intermolecular y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización y se dice entonces que la proteína se encuentra desnaturalizada.

En una proteína cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan sólo tienen en común la estructura primaria, es decir, la secuencia de AA que la componen. Los demás niveles de organización estructural desaparecen en la estructura desnaturalizada.

La desnaturalización provoca diversos efectos en la proteína:

1. cambios en las propiedades hidrodinámicas de la proteína: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusión

2. una drástica disminución de su solubilidad, ya que los residuos hidrofóbicos del interior aparecen en la superficie

3. pérdida de las propiedades biológicas

Una proteína desnaturalizada cuenta únicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalización es reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la información necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuración. El proceso mediante el cual la proteína desnaturalizada recupera su estructura nativa se llamarenaturalización. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos deaislamiento y purificación de proteínas, ya que no todas la proteínas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalización conduce a la pérdida total de la solubilidad, con lo que la proteína precipita. La formación de agregados fuertemente hidrofóbicos impide su renaturalización, y hacen que el proceso sea irreversible.

3. PROCEDIMIENTO (pasos realizados)

a) Tomar 4 tubos de ensayos limpios, secos y etiquetarlos en orden.

b) Añadir a cada tubo 2ml de solución de ovoalbúmina(preparada anteriormente)

c) Con la ayuda de una pipeta graduada añadir al primer tubo 1ml de HCl, añadir al 2do tubo 1ml de disolución de NaOH, añadir al 3er tubo 1ml de etanol 96% y por ultimo añadir al 4to tubo 1ml de agua destilada y calentamos en baño maria a 100ºC( el agua llego a una Tº de 92ºC).

4. CALCULOS y RESULTADOS

 Albumina(5mg/1ml)

5mg--------1ml

mg-------25ml

mg = 125mg

peso real = 0.125g

 NaOH 5M

Datos: pm= 40g/mol

g = V(L) X N X Pm/val ; N= M.val

g = 0.001 x 5 x 40/1

g = 0.2g

 HCl 5M

Datos: pm= 36.5g/mol; p=1.185g/ml

g = V(L) X N X Pm/val ; N= M.val

g = 0.025 x 5 x 36.5/1

g = 4.5625g

%= 36.5%

g = 4.5625x100/36.5%

g=12.5g

V= m/d; 12.5g/1.185

V= 10.55ml = 10.56ml.

5. RESULTADOS Y ANALISIS:

• En el 1er tubo al añadir HCl observamos un blanco precipitado. Al agregar HCl a la albúmina esta mezcla se separó en dos fases y la proteína se coaguló. Esta reacción se da debido al ph acido al que fue sometida la proteína. A causa de esto, algunos grupos carbonilo de las cadenas laterales se protonan y pierden su carga iónica, produciendo cambios conformacionales que provocan su desnaturalización.

• En el 2do tubo al añadir sosa se observa un color transparente.

• En el 3er tubo al añadir etanol 96% se observa un color blanquecino precipitado.

• En el 4to tubo al añadir agua destilada se observa un color transparente, una vez calentado la solución en bano maria a 93ºC se forma un precipitado en el tubo.

• En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de la proteína, mientras que en la coagulación se ha producido un cambio en el estado físico y en la estructura química por ESO ES IRREVERSIBLE.

ANEXO PRACTICA 3 (reconocimiento de aa) 18/10/13

1. FUNDAMENTO TEORICO:

Los aminoácidos pueden detectarse con reactivos que reaccionen con sus grupos caracteristicos, el carboxilo, el amino u otros de la cadena lateral. Aunque el numero de ensayos es muy grande, uno de los mas utilizados es la detección con ninhidrina, que el produce un color purpura que en algunos casos puede ser rosa o rojizo. Si partimos de proteínas debemos hidrolizarla la hidrolisis puede ser acida (HCl 6N/90ºC/18h9, básica y enzimática.

La reacción del biuret la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al

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