Siembras e incubación

Practica No. 3

Siembras e Incubación

A). Introducción: Sembrar es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo,  multiplicación y posteriormente estudio del mismo. Muchos microorganismos requieren de características específicas para poder desarrollarse adecuadamente, por ello existen distintas técnicas de siembra.  

Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada. Es un equipo de laboratorio indispensable, pues sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos, regulando factores de crecimiento viables como por ejemplo la temperatura, la humedad y la ventilación. La formación de colonias visibles con características particulares permite diferenciar a los microorganismos, así como detectar contaminantes en los cultivos puros. Las colonias provenientes de un mismo microorganismo deben ser iguales en forma, tamaño y color; al microscopio deben presentar las mismas características morfológicas y tintoriales.

(Frazier, 1981)

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

• Que se efectúen asépticamente.
• Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados.
• Que se realicen solo los manipuleos indispensables.
• Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un Mechero.

Se aplican técnicas de siembra o de inoculación específicas para cada microorganismo y de acuerdo a la presentación del medio.

Medios líquidos:

• Siembra por extensión
• Siembra por picadura

Medios sólidos:

-        Siembra por inmersión

-        Siembra en doble capa

-        Siembra en superficie

-        Siembra en estría

B). Objetivo: El propósito de la presente práctica es conocer y realizar las diferentes técnicas de siembras utilizadas para el desarrollo de cultivos microbianos, utilizando como medio de cultivo cajas Petri y tubos de ensayo. Aprender a trabajar de forma aséptica. Distinguir las condiciones de incubación para el cultivo de bacterias y hongos.

C) Equipo, materiales y reactivos:

D). Procedimiento o técnica:

1.- Limpiar y desinfectar la zona en donde se trabajará.

2.- Preparar la zona aséptica.  

4.- Retirar cuidadosamente de la incubadora los medios de cultivo.  

•        Procedimiento para siembra en tubos de ensayo:

SIEMBRA POR PICADURA EN MEDIO SÓLIDO

1.- Flamear el hilo de platino colocándolo de forma perpendicular a la mesa de trabajo en la parte alta del mechero hasta obtener un color rojo vivo. Después esperar a que se enfríe.

2.- Tomar de la gradilla el tubo y retirar el tapón, posteriormente flamear la boca del mismo pasándolo por la llama del mechero.

3.- Con el hilo de platino se pica el inoculo, tomando así una pequeña muestra, en seguida se introduce (únicamente el hilo) cuidadosamente y de forma vertical en el medio contenido en la parte inferior del tubo, después retirarlo, procurando que salga desde el mismo punto por donde entro.

4.- Flamear la boca del tubo, taparlo y colocar en la gradilla.

5.- Nuevamente se flamea el tubo y se espera a que enfrié para después lavar.

6.- Incubarlo a 37°C de 24-48 h (comprobar el crecimiento).

SIEMBRA EN AGAR INCLINADO

 1.- Esterilizar el asa de platino flameándolo por el mechero hasta llegar al rojo vivo y esperar a que este enfrié y tomar el inoculo.

 2.- Tomar de la gradilla el tubo a inocular, destaparlo y flamear su boca.

3.- Introducir el asa y realizar el mayor número de estrías que sea posible sobre la superficie del agar, e4n forma de zigzag y ascendente, esto quiere decir, desde el fondo hasta la parte de arriba del tubo.

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