Técnica aséptica, métodos de inoculación y morfología macroscópica de bacterias

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Universidad Autónoma de Nuevo León

Facultad de Ciencias Biológicas

Carrera: Licenciado en Biología

Unidad de Aprendizaje: Microbiología

Facilitadora: Dra. Mayra Alejandra Gómez Govea

Integrantes de equipo:

• Fernanda Elizabeth González Suárez
• Kevin Benjamín Venable Carranza
• César Aldair Xala Hernández

Grupo: 122

Reporte de práctica N°4: Técnica aséptica, métodos de inoculación y morfología macroscópica de bacterias.

San Nicolás de los Garza, Nuevo León, México. 1 de noviembre de 2020

4. TÉCNICA ASÉPTICA, MÉTODOS DE INOCULACIÓN Y MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE BACTERIAS.

Etapa 2. Nutrición y procesos básicos del catabolismo de los microorganismos

1. Elemento de competencia

Identificar los requerimientos nutricionales de los microorganismos y los procesos de obtención de energía en los procariotas para cultivarlos adecuadamente en el laboratorio.

2.  Propósito de la práctica

 Que el alumno:

• Aplique correctamente la técnica de la transferencia aséptica para inocular microorganismos. Inocule microorganismos en medios de cultivo sólidos, líquidos y semisólidos.
• Aísle colonias microbianas en agar por estría cruzada, extensión y vertido en placa. Realice adecuadamente la inoculación y aislamiento de microorganismos aplicando la técnica aséptica. Identifique las variantes de la morfología colonial bacteriana y describir completamente dichas características para diferentes microorganismos.

3.  Introducción  

Generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios líquidos (caldos) o solidificados con agar para su propagación y/o conservación, así como para estudiar sus características de crecimiento. Es importante recordar que la inoculación de los microorganismos en los medios de cultivo siempre deberá realizarse en un área aséptica (cerca del mechero o en una campana de flujo laminar), condiciones que limitan la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes (1). Las técnicas de aislamiento permiten la obtención de microorganismos a partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, exudados, etc.) en las que hay una gran diversidad microbiana, así como para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos. Los cultivos puros están formados por un solo tipo de microorganismo y son indispensables para conocer las características morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica, patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.

Los medios líquidos son inoculados comúnmente por depósito de un pequeño inóculo en el líquido, mientras que los agares blandos son inoculados por picadura o punción. Los agares sólidos en tubo son sembrados por estría simple y los agares en placa Petri pueden ser inoculados por estría simple, estría cruzada, extensión en superficie o vertido en placa.

La estría simple consiste en inocular en zigzag con el asa la superficie del agar sin romper el agar, trazando líneas paralelas como se observa en la siguiente imagen (fig. 3).

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La estría cruzada (figura 4) consiste en hacer una serie de estrías que tienen como objetivo descargar el inóculo y desgastarlo hasta que se puedan obtener colonias aisladas. Se realizan estrías que se cruzan entre sí, en diferentes planos de la caja. Observe la siguiente imagen.

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El método de extensión en superficie se hace con el inóculo en toda la superficie del agar de manera homogénea con un asa de Driglasky o hisopo estéril (fig. 5); y para el vertido en placa se coloca el inóculo en la placa vacía y se homogeniza con el medio de cultivo aún líquido antes de que solidifique (fig. 6).

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Para aislar células microbianas, son utilizados medios de cultivo sólidos.  Robert Koch fue el primero que utilizó estos medios. El uso inicial de las rebanadas de papa presentaba muchos problemas. Además de que sólo permitía el crecimiento de bacterias en su superficie y ésta se cubría frecuentemente de hongos. Koch necesitaba un método más fiable y reproducible para cultivar las bacterias en medios sólidos y encontró la solución en el empleo del agar.

Al principio Koch utilizó la gelatina como agente solidificante de los caldos nutritivos que empleaba para cultivar las bacterias y desarrolló un método para preparar láminas horizontales de un medio sólido que mantenía libre de contaminantes cubriéndolas con una campana o tapadera de cristal. Los caldos nutritivos con gelatina constituían un buen medio de cultivo para el aislamiento y estudio de varias bacterias, pero presentaba algunos inconvenientes, y el más importante era que la gelatina no se mantenía sólida a la temperatura del cuerpo humano (37ºC), que es la óptima para el crecimiento de la mayoría de los microorganismos que son patógenos para el hombre. Por tanto, se necesitaba un agente solidificante diferente.

El agar es un polisacárido derivado de las algas rojas. En el siglo XIX se utilizaba mucho como un agente gelificante. El primer uso del agar como agente solidificante para medios de cultivo bacteriológicos se debe a Walter Hesse, un colaborador de Koch. Cuando se ensayó como agente solidificante en medios de cultivo, se apreció que superaba a la gelatina en muchos aspectos. El agar presenta muchas propiedades que lo hacen más adecuado como agente solidificante de los medios de cultivo para microorganismos. En particular, permanece sólido a 37 °C y después de fundirse permanece líquido hasta los 45°C, pudiendo así verterse en recipientes estériles. Además, a diferencia de la gelatina, los microorganismos no la metabolizan y por tanto no producen licuefacción del medio. Además permite que muchos medios sólidos sean transparentes, lo que facilita diferenciar las colonias bacterianas de las partículas inanimadas del material que contiene el medio.

En 1887 el bacteriólogo alemán Richard Petri publicó un corto artículo describiendo una modificación de las láminas horizontales de Koch.

[pic 7]La mejora de Petri consistía en la útil y permanente aplicación de las cajas o placas dobles circulares que todos conocemos por su nombre. Koch fue consciente de las implicaciones de sus métodos de obtención de cultivos puros en relación con el estudio de la sistemática bacteriana. Observó que sobre el medio sólido expuesto a un objeto contaminante, se desarrollan colonias con formas diferentes (variando en color, forma, tamaño, relieve, etc.) y que tales colonias se podían perpetuar y diferenciar entre sí por sus características particulares. Las células de diferentes colonias diferían microscópicamente y a menudo también en sus temperaturas óptimas de crecimiento o en sus requerimientos nutricionales. Koch se dio cuenta de que todas esas diferencias entre microorganismos equivalían a los criterios que los taxonomistas habían establecido para la clasificación de los organismos superiores como animales   y   plantas. En   palabras   de   Koch (traducidas del alemán): “toda bacteria que mantenga las características que la diferencian de otras, cuando se cultivan en el mismo medio y bajo las mismas condiciones, debería ser designada como especie, variedad, forma o cualquier otra designación adecuada”. Estas aportaciones constituyeron los instrumentos necesarios para el desarrollo de campos como el de la taxonomía bacteriana, la genética y otras disciplinas en el área médica. Actualmente se utilizan medios sólidos que nos permiten aislar diferentes microorganismos sobre la superficie de los mismos (1,2).

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