ÁREA DE LA SALUD HUMANA
Enviado por • 2 de Abril de 2013 • Tesis • 2.127 Palabras (9 Páginas) • 606 Visitas
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
ÁREA DE LA SALUD HUMANA
CARRERA DE MEDICIANA
GUIA DE PRÁCTICAS EN EL LABORATORIO CON SUPERVISIÓN DOCENTE
• UNIDAD: Microbiología
• DOCENTE: Dr. Tito Goberth Carrión Dávila
• PRÁCTICA NÚMERO: Dos
• TEMA: Técnicas de Coloración
• OBJETIVOS:
-Conocer las técnicas de coloración de Gram y Zielh Neelsen.
-Describir el fundamento de la coloración Gram y Zielh Neelsen.
-Establecer los colorantes utilizados en cada una de las técnicas.
-Realizar el procedimiento de dichas coloraciones.
• FUNDAMENTO TEÓRICO DE LA PRÁCTICA A EJECUTAR:
El fundamento de las distintas coloraciones de las bacterias en general se basa en la diferencia estructural de la pared, así: En la coloración de Gram, la estructura que cobra importancia en la retención de la violeta de Genciana y el Yoduro de potasio es el peptidoglicano o mureina, mucho más desarrollado en la pared de las bacterias Gram positivas.
En la coloración de Zielh Neelsen o Alcohol Acido Resistente, se fundamenta en la presencia de un alto contenido de lípidos y ácidos micòlicos en la pared de las mycobacterias.
• TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA EJECUTAR LA PRÁCTICA:
Previamente a la realización de las diferentes técnicas de coloración se procederá a realizar el frotis de las diferentes muestras, sean estos sólidos o líquidos sobre un portaobjetos, se dejará secar y fijar mediante el calor, e inmediatamente se efectuará las técnicas de coloración.
Gram
Sobre el frotis seco y fijado al calor se coloca:
1. Violeta de Genciana, con lo cual se debe cubrir toda la extensión del frotis, por el lapso de 1 minuto.
2. Se lava con agua de la llave o con un dispensador de plástico con agua destilada.
3. Se coloca yoduro de potasio por el laso de 1 minuto.
4. Se lava.
5. Se le coloca fucsina fenicada o safranina por el tiempo de 15 segundos.
6. Se lava y se seca.
7. La placa está lista para ser observada al microscopio, con el lente de 100x o de inmersión.
Zielh Neelsen o B.A.A.R. o Baciloscopia
Sobre el frotis seco y fijado al calor se coloca:
1. Fucsina fenicada, por el tiempo de 5 minutos, mientras se calienta la placa con la lámpara de alcohol o mechero de bunsen, hasta que emita vapor.
2. Se lava con agua destilada o bien agua de llave, cuidando que el chorro no coincida directamente sobre el frotis, por el riesgo que se desprenda el material biológico.
3. El decolorante Alcohol-Acido, por dos minutos.
4. Lavar de la misma manera del paso dos.
5. Azul de Metileno, por el tiempo de 2 minutos.
6. Lavar similar al paso dos y dejar secar.
7. La placa esta lista para ser observado al microscopio, con el lente de 100x o de inmersión.
• RECURSOS DIDÁCTICOS:
En cada una de las técnicas de coloración se realizará una exposición introductoria del docente e inmediatamente se hará la demostración práctica.
Se utilizará materiales como dispositivos para la decoloración, pipetas, puntas, lámpara de alcohol, relojes, colorantes de agua destilada.
• RESULTADOS DE APRENDIZAJE: Los estudiantes:
-Conocen las técnicas de coloración de Gram y Zielh Neelsen.
-Describen el fundamento de la colaboración Gram y Zielh Neelsen.
-Establecen los colorantes utilizados en cada una de las técnicas.
-Realizan el procedimiento de dichas coloraciones.
• BIBLIOGRAFÍA:
• FORBES, B; SAHM. D.: Diagnóstico Microbiológico, 11a edición, Editorial Médica Panamericana, Buenos Aires, 2004, pág. 1115.
• VULLO, D.; WACHSMAN, M. Y ALCHE, L: Microbiología Médica: Manual de Técnicas de Laboratorio para la Enseñanza de Microbiología Básica Aplicada, Ed. Atlante s.r.L, Buenos Aires, 2000, pág. 261.
• ORGANIZACIÒN PANAMERICANA DE LA SALU-OPS: Manual de Técnicas para un Laboratorio de Salud, publicación científica Nº 439, Washington, pág. 487, 1993.
• PREGUNTAS A RESOLVER
¿Por su forma y coloración las bacterias se clasifican en?
Según su forma las bacterias se han clasificado en: cocos, bacilos, espirilos y espiroquetas, mientras que el método de identificación de las bacterias es la Tinción diferencial de Gram que permite identificar la morfología de la célula bacteriana en cocos y bacilos Gram positivos y Gram negativos según la estructura de su pared celular.
Se puede discriminar entre dos grandes grupos de bacterias: Gram positivas las misma que se tiñen de color violeta y las Gram negativas las cuales se tiñen de color rosado, lo cual es debido a las diferencias en la composición de su pared celular.
¿Cuáles son los principales características de las bacterias Gram positivas y Gram negativas?
Las Bacterias Gram Positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas". La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior, dicha capa confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, las Gram-positivas no presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa.
Las siguientes características están presentes generalmente en una bacteria Gram-positiva:
• Membrana citoplasmática.
• Capa gruesa de peptidoglicano.
• Ácidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en ciertos tipos de adherencia.
• Polisacáridos de la cápsula.
• Si algún flagelo está presente, este contiene dos anillos como soporte en oposición a los cuatro que existen en bacterias Gram-negativas porque las bacterias Gram-positivas tienen solamente una capa membranal.
Bacterias Gram Negativas son aquellas bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el nombre de "Gram-negativas"
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades.
No presentan ácidos teicoicos ni ácidos lipoteicoicos, típicos de las bacterias Gram-positivas. Las lipoproteínas se unen al núcleo de polisacáridos, mientras que en las bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoproteínas. La mayoría no forma endosporas.
¿Qué tipo de Mycobacterias conoce usted?
Personalmente mi conocimiento es reducido per según investigaciones realizadas se conoce que en 1950, Timpe y Runyon propusieron una clasificación útil de Mycobacterium en cuatro grupos que se basaba en la Velocidad de crecimiento sea este rápido o lento, según sea superior o inferior a una semana, Producción de pigmento en presencia o ausencia de luz siendo por lo tanto fotocromógeno, escotocromógeno y no cromógeno y finalmente según las Características coloniales. En la tabla se presenta una clasificación modificada de la original de Runyon que incluye los miembros del género Mycobacterium de importancia humana actualmente:
• Anexos
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
ÁREA DE LA SALUD HUMANA
CARRERA DE MEDICIANA
GUIA DE PRÁCTICAS EN EL LABORATORIO CON SUPERVISIÓN DOCENTE
• UNIDAD: Microbiología
• DOCENTE: Dr. Tito Goberth Carrión Dávila
• PRÁCTICA NÚMERO: Dos
• TEMA: Técnicas de Coloración
• OBJETIVOS:
-Conocer las técnicas de coloración de Gram y Zielh Neelsen.
-Describir el fundamento de la coloración Gram y Zielh Neelsen.
-Establecer los colorantes utilizados en cada una de las técnicas.
-Realizar el procedimiento de dichas coloraciones.
• FUNDAMENTO TEÓRICO DE LA PRÁCTICA A EJECUTAR:
El fundamento de las distintas coloraciones de las bacterias en general se basa en la diferencia estructural de la pared, así: En la coloración de Gram, la estructura que cobra importancia en la retención de la violeta de Genciana y el Yoduro de potasio es el peptidoglicano o mureina, mucho más desarrollado en la pared de las bacterias Gram positivas.
En la coloración de Zielh Neelsen o Alcohol Acido Resistente, se fundamenta en la presencia de un alto contenido de lípidos y ácidos micòlicos en la pared de las mycobacterias.
• TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA EJECUTAR LA PRÁCTICA:
Previamente a la realización de las diferentes técnicas de coloración se procederá a realizar el frotis de las diferentes muestras, sean estos sólidos o líquidos sobre un portaobjetos, se dejará secar y fijar mediante el calor, e inmediatamente se efectuará las técnicas de coloración.
Gram
Sobre el frotis seco y fijado al calor se coloca:
1. Violeta de Genciana, con lo cual se debe cubrir toda la extensión del frotis, por el lapso de 1 minuto.
2. Se lava con agua de la llave o con un dispensador de plástico con agua destilada.
3. Se coloca yoduro de potasio por el laso de 1 minuto.
4. Se lava.
5. Se le coloca fucsina fenicada o safranina por el tiempo de 15 segundos.
6. Se lava y se seca.
7. La placa está lista para ser observada al microscopio, con el lente de 100x o de inmersión.
Zielh Neelsen o B.A.A.R. o Baciloscopia
Sobre el frotis seco y fijado al calor se coloca:
1. Fucsina fenicada, por el tiempo de 5 minutos, mientras se calienta la placa con la lámpara de alcohol o mechero de bunsen, hasta que emita vapor.
2. Se lava con agua destilada o bien agua de llave, cuidando que el chorro no coincida directamente sobre el frotis, por el riesgo que se desprenda el material biológico.
3. El decolorante Alcohol-Acido, por dos minutos.
4. Lavar de la misma manera del paso dos.
5. Azul de Metileno, por el tiempo de 2 minutos.
6. Lavar similar al paso dos y dejar secar.
7. La placa esta lista para ser observado al microscopio, con el lente de 100x o de inmersión.
• RECURSOS DIDÁCTICOS:
En cada una de las técnicas de coloración se realizará una exposición introductoria del docente e inmediatamente se hará la demostración práctica.
Se utilizará materiales como dispositivos para la decoloración, pipetas, puntas, lámpara de alcohol, relojes, colorantes de agua destilada.
• RESULTADOS DE APRENDIZAJE: Los estudiantes:
-Conocen las técnicas de coloración de Gram y Zielh Neelsen.
-Describen el fundamento de la colaboración Gram y Zielh Neelsen.
-Establecen los colorantes utilizados en cada una de las técnicas.
-Realizan el procedimiento de dichas coloraciones.
• BIBLIOGRAFÍA:
• FORBES, B; SAHM. D.: Diagnóstico Microbiológico, 11a edición, Editorial Médica Panamericana, Buenos Aires, 2004, pág. 1115.
• VULLO, D.; WACHSMAN, M. Y ALCHE, L: Microbiología Médica: Manual de Técnicas de Laboratorio para la Enseñanza de Microbiología Básica Aplicada, Ed. Atlante s.r.L, Buenos Aires, 2000, pág. 261.
• ORGANIZACIÒN PANAMERICANA DE LA SALU-OPS: Manual de Técnicas para un Laboratorio de Salud, publicación científica Nº 439, Washington, pág. 487, 1993.
• PREGUNTAS A RESOLVER
¿Por su forma y coloración las bacterias se clasifican en?
Según su forma las bacterias se han clasificado en: cocos, bacilos, espirilos y espiroquetas, mientras que el método de identificación de las bacterias es la Tinción diferencial de Gram que permite identificar la morfología de la célula bacteriana en cocos y bacilos Gram positivos y Gram negativos según la estructura de su pared celular.
Se puede discriminar entre dos grandes grupos de bacterias: Gram positivas las misma que se tiñen de color violeta y las Gram negativas las cuales se tiñen de color rosado, lo cual es debido a las diferencias en la composición de su pared celular.
¿Cuáles son los principales características de las bacterias Gram positivas y Gram negativas?
Las Bacterias Gram Positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas". La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior, dicha capa confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, las Gram-positivas no presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa.
Las siguientes características están presentes generalmente en una bacteria Gram-positiva:
• Membrana citoplasmática.
• Capa gruesa de peptidoglicano.
• Ácidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en ciertos tipos de adherencia.
• Polisacáridos de la cápsula.
• Si algún flagelo está presente, este contiene dos anillos como soporte en oposición a los cuatro que existen en bacterias Gram-negativas porque las bacterias Gram-positivas tienen solamente una capa membranal.
Bacterias Gram Negativas son aquellas bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el nombre de "Gram-negativas"
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades.
No presentan ácidos teicoicos ni ácidos lipoteicoicos, típicos de las bacterias Gram-positivas. Las lipoproteínas se unen al núcleo de polisacáridos, mientras que en las bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoproteínas. La mayoría no forma endosporas.
¿Qué tipo de Mycobacterias conoce usted?
Personalmente mi conocimiento es reducido per según investigaciones realizadas se conoce que en 1950, Timpe y Runyon propusieron una clasificación útil de Mycobacterium en cuatro grupos que se basaba en la Velocidad de crecimiento sea este rápido o lento, según sea superior o inferior a una semana, Producción de pigmento en presencia o ausencia de luz siendo por lo tanto fotocromógeno, escotocromógeno y no cromógeno y finalmente según las Características coloniales. En la tabla se presenta una clasificación modificada de la original de Runyon que incluye los miembros del género Mycobacterium de importancia humana actualmente:
• Anexos
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