Laboratorio 7 Bioquimica.

UNIVERSIDAD DEL BÍO BÍO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
NUTRICIÓN Y DIETÉTICA[pic 1]

INFORME PRÁCTICO N° 7

“Cuantificación de proteína”

Integrantes:

• Marjorie Navia Pinto
• Catalina Escárate Ovalle

Profesora:

• Cristina Valenzuela

Asignatura:

• Laboratorio de Bioquímica Nutricional

Fecha:

• 03 de Enero del 2017

INTRODUCCIÓN

Las proteínas, como ya es sabido, cumplen una infinidad de funciones en el ser humano, algunas de estas funciones puede ser la contracción muscular, el transporte o almacenamiento, entre otras funciones.

Debido a las enormes formaciones en las estructuras de las diferentes proteínas, es que  éstas logran desarrollar todo tipo de función en el organismo.

La cuantificación de proteínas se utiliza inicialmente para el estudio de todo mecanismo denominado proteína, ya sea la actividad de una enzima o el contenido proteico de un alimento. Existen ciertos métodos de cuantificación de proteínas, con los cuales se trabajó en este práctico, estos son:

• Método de Biuret
• Método de Bradford

HIPÓTESIS

• Como hipótesis, se cree queen ambos métodos, se obtendrán reacciones positivas,  pero las coloraciones dependerán de qué método se esté utilizando (Biuret = coloración púrpura; Bradford = coloración azul).
• En ambos métodos, al momento de analizar la capacidad de absorción, se espera tener una línea recta en ascendencia en un gráfico cuyos datos sean la capacidad de absorción de cada proteína.

OBTETIVOS

• Conocer los diferentes métodos para la cuantificación de proteínas.
• Mediante los métodos de Biuret y Bradford cuantificar proteínas, realizar una curva de calibración y determinar la medición de la absorvancia.
• Cuantificar dos muestras problemas.

MATERIALES Y MÉTODOS

• Reactivo Biuret
• Reactivo Bradford
• Proteína
• Espectrofotómetro
• Tubos de ensayo
• Buretas y pipetas
• H2O
• Muestra problema n°6

METODO:

1. Método de Biuret:

Se dispuso cuatro tubos de ensayo, además de un 5° tubo que se utilizo para la muestra problema, en el 1° tubo se coloco 0,2 ml de proteína y 0,8 ml de H2O, en el 2° 0,4 ml de proteína y 0,6 ml de H20, en el 3° 0,6 ml de proteína y 0,4 ml de H2O y en el 4º tubo se colocó 0,8 ml de proteína y 0,2 ml  de H2O.

 La finalidad de esto es tener 1 ml en cada tubo de ensayo pero con diferentes cantidades de agua y proteína, por lo tanto en el tubo número 5, se le agregó 1 ml de la muestra problema , (que en nuestro caso fue el tubo 6º), ya que esta contiene una cantidad desconocida de agua y proteína. Luego se le agrego a cada tubo 1ml de reactivo de Biuret, se agito cada tubo y se dejo reposar por 20 minutos, luego se vertió cada tubo en una cubeta que se dispuso en el espectrofotómetro, para medir su capacidad de absorbancia. Se realizó la mezcla “blanco” la cual contiene 1 ml de agua y 1 ml del reactivo Biuret. Esta mezcla es para medir la capacidad de absorción cero.

1. Método de Bradford: Se dispuso de 4 tubos de ensayo, además de un 5° tubo que fue utilizado para la muestra problema. En el 1° tubo se coloco 0,1 ml de proteína y 0,9 ml de H2O, en el 2° 0,2 ml de proteína y 0,8 ml de H2O, en el 3° 0,3 ml de proteína y 0,7 ml de H2O y en el 4º tubo  se colocó 0,5 ml de proteína y 0,5 de H2O.

Al igual que en el caso anterior, la finalidad de esto es tener 1 ml en cada tubo de ensayo pero con diferentes cantidades de agua y proteína, por lo tanto en el tubo número 5, se le agregó 1 ml de la muestra problema, (que en nuestro caso fue el tubo 6º), ya que esta contiene una cantidad desconocida de agua y proteína.

 Al momento de tener todo agregado, se le quitó a cada tubo una alícuota de la mezcla (0,1ml) y tales  cantidades se agregaron a otros tubos de ensayos respectivos y finalmente se agregó 1 ml de reactivo de Bradford a cada tubo. Se dejaron reposar por 10 minutos. Al pasar el tiempo, se llevó a un espectrofotómetro para medir su capacidad de absorción. Se realizó la mezcla “blanco”, mezclando 1ml de agua y 1ml del reactivo Bradford, esto para medir la capacidad de absorción cero.

RESULTADOS

Se nos entregó un tubo de ensayo nº6 por muestra problema en ambos métodos, con el cual trabajamos a lo largo de este laboratorio.

1.- Método de Biuret

[pic 2]

Destacamos que se manifestó en general, una coloración violeta en casi  todos los  tubos.

[pic 3]

2.- Método de Bradford

[pic 4]

Destacamos que se manifestó una coloración azul oscura en todos los tubos.

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