Fundamento de las tinciones negativas y positivas, ácidas y básicas.

1. Analiza tus resultados y compáralos con lo descrito en la bibliografía. Enfatiza en el fundamento de las tinciones negativas y positivas, ácidas y básicas.

De acuerdo a lo obtenido durante las distintas observaciones es de importancia recalcar que en las preparaciones húmedas, con tinción diferencial de Gram se observaron bacterias del tipo Gram negativas en forma de bacilos, estreptobacilos, cocos y estreptococos lo cual no sería nada extraño puesto que se examinaron muestras de cultivos que se hicieron en base a agua potable las cuales, no están exentas de estos tipos me microorganismos.

 Las observaciones en seco, también con tinción diferencial de Gram  se pudieron distinguir bacterias del tipo gramnegativos con colonia características a las de muestras en seco aunque el cultivo del cual se tomó la muestra cambio se observaron colonia de cocos, estreptococos y bacilos.

Para las observaciones de mohos se usó una muestra de hongo obtenida de un cultivo donde se logró aislar, en la cual se pudieron observar conidios e hifas, esto debido al tipo de tinción utilizada.

1. Describe el fundamento de cada una de las tinciones que realizaste.

Tinción positiva: el fundamento básico de esta tinción se basa en que el colorante usado tiñe a la célula y aumenta el contraste, lo cual ayuda a la visualización de las células, nosotros por ejemplo usamos la tinción con azul de metileno, lo cual nos ayudó a la mejor apreciación de los microorganismos presentes en la muestra.

Tinción negativa: el fundamento de este tipo de tinción se basa en la aplicación de sustancias que no tiñan a los microorganismos presentes en la muestra, sino que coloreen el medio que los rodea.

Tinción de azul lacto fenol: esta tinción se emplea para la observación de hongos, en este caso se usó pan con mohos, este colorante tiene tres funciones básicas. 1.- destruye la flora acompañante (bacterias). 2.- el ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear una película que protege del gradiente osmótico en el interior y exterior de dicha célula. 3.- tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios de los hongos microscópicos.

Tinción simple: en este tipo de tinción se usa regular mente violeta geneciana, o azul de metileno, la función de esta tinción se basa en que el microorganismo se tiña y se le puedan ver sus formas y estructuras. Esto se basa en que estos compuestos tienen cargas positivas, puesto que la pared celular de las bacterias poseen carga negativa lo que hace atraer esta sustancia y enlazar y el cromógeno

Tinción de Gram: las células bacterianas sanas y vivas se tiñen sin problema de cristal violeta, un colorante básico y se tiñen poco o nada con colorantes ácidos, como la eosina. El cristal violeta es introducido activamente por las bacterias.

El lugol forma un compuesto insoluble con el cristal violeta. El lavado con alcohol-acetona, un solvente lipídico, actúa con la pared celular y afecta a la membrana plasmática a la que lo unen los peptidoglicanos de la pared de las bacterias gramnegativos de tal manera que dejan salir el complejo lugol-cristal violeta.

Por otra parte las grampositivas poseen una pared gruesa de peptidoglicanos con pocos lípidos por lo que el alcohol-acetona no pueden entrar y retien el colorante. Si la decoloración no se lleva a cabo correctamente las gramnegativas pueden parecer grampositivas.

Al final se añade safranina que es un tinte que tiñe en rojo, de esta manera las células gramnegativas quedan teñidas en rojo-rosa de forma diferenciadora de las grampositivas que se tiñen de violeta intenso o azul.

Discusión.

En la practica se realizaron las tinciones de muestras obtenidas apartir de cultivos hechos con anterioridad, en la practica se realizo el frotis de las muestras, usando dos preparaciones en seco y preparaciones húmedas, lo anterior con el fin de ver las diferencias que presentan las muestras al añadirles humedad, además se obtuvo otra muestra de un hongo obtenido de igual manera de un cultivo. A las muestras se les aplicaron tinciones diferenciales como tinción positiva, tinción negativa, tinción diferencial de gram.

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