Bioquímica General Propiedades de los aminoácidos

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Universidad Anáhuac México Norte

Facultad de Ciencias de la Salud

Licenciatura en Biotecnología

Asignatura

Bioquímica General

Titulo

Propiedades de los aminoácidos

Numero de Sesiones

2

Prac

Resultados de Aprendizaje

Que el alumno comprenda las propiedades de los aminoácidos y con ello pueda identificarlos experimentalmente.

Objetivo

• Realizar la gráfica de disociación de H+ de los aminoácidos entregados en clase a través de la titulación.

Material

MATERIAL

• Potenciómetro.
• Soporte universal
• Bureta
• Pinzas para bureta
• Tres vasos de precipitado
• Un agitador magnético

REACTIVOS:

• Hidróxido de Sodio
• Solución de dos aminoácido a 0.06M (en HCl 0.005M, pH1)
• Solución de NAOH 0.3, (50 ml).
• Soluciones amortiguadoras

Metodología

Metodología

• Colocar la solución de NAOH en la bureta, previo medir el pH
• Colocar el potenciómetro
• Homogenizar el aminoácido y colocarlo en un vaso de precipitado de 100 ml.
• Iniciar la titulación agregando 0.2 ml de NAOH y medir pH.
• Tabular los valores de pH para cada volumen.
• Adicionar NAOH hasta alcanzar el valor de pH original del NAOH

Cuestionario

1. ¿Qué importancia posee el grupo COOH y NH3+  en la determinación del pKa?

2. ¿Qué relación existe entre el comportamiento del pKa de los a.a. y una solución amortiguadora?

3. Escriba las reacciones de ionización de los siguientes a.a. en los siguientes pH: 1.3, 5.86, 8.6 y 10.96

• Ac. Glutámico
• Glicina
• Fenilalanina
• Arginina
• Serina

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Universidad Anáhuac México Norte

Facultad de Ciencias de la Salud

Licenciatura en Biotecnología

Asignatura

Bioquímica General

Titulo

Cuantificación de proteínas totales

Numero de Sesiones

2

Prac

3

Resultados de Aprendizaje

Qué el alumno comprenda el fundamento y la técnica paran una correcta cuantificación de proteínas totales en un macroensayo.

objetivo

Determinar la concentración de proteínas totales de diferentes muestras utilizando el método de Brandford.

Material

1 Gradilla

10  Tubos de ensayo

1   Mortero con pistilo

2   Agitadores de vidrio

1  Propipeta

1  Pipeta de 5 ml.

4 Celdas para espectrofotómetro

1  Espectrofotómetro

REACTIVOS

Reactivo de Bradford

Kit de concentraciones estándares de ϒ globulina bovina

Agua destilada

Metodología

Macro ensayo a 5 ml.

1. Enumere los tubos de ensaye de acuerdo a la siguiente tabla:

Si la muestra es líquida realizar una dilución 1:100 en agua y tomar las alícuotas correspondientes 0.05 y 0.10 ml; si la muestra es sólida agregar unas gotas de NaOH para facilitar su solubilidad.

Una vez realizadas las diluciones medir en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 595 nm; anotar las absorbancias y hacer los cálculos necesarios.

Realizar las tablas y gráficas para la curva patrón tanto para el macroensayo y el microensayo, además de las diferentes muestras analizadas.

Determinar la cantidad de proteínas de las muestras problema, mostrando los cálculos.

Cuestionario

1.- Describa cómo funciona el espectrofotómetro.

2.- En qué condiciones se puede usar el macroensayo?

3.- ¿Cuál es la importancia del método de Bradford?

4.- Menciona 5 ejemplos en el que emplearías el método de Bradford.

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Universidad Anáhuac México Norte

Facultad de Ciencias de la Salud

Licenciatura en Biotecnología

Asignatura

Bioquímica General

Titulo

MEDICIÓN DE CREATININA, UREA Y ÁC. ÚRICO

Numero de Sesiones

2

Prac.

Resultados de Aprendizaje

Que el alumno obtenga habilidades para obtener mediciones bioquímicas utilizando técnicas colorimétricas

objetivo

Cuantificar urea, ác. Úrico y creatinina en una muestra de orina.

Material

1 micropipeta por equipo de 10 μl

1 micropipeta por equipo de 1000 μl

Puntas para micropipeta

4 vasos de precipitado de 100 ml

2 probetas de 50 ml

10 tubos de ensayo

Baño maría

Espectrofotómetro para lecturas de 600 ± 20 nm

Agua destilada

Muestra

Metodología

Cuantificación de uréa

1.- Diluir la muestra 1:50 con agua destilada

2.- Atemperar los reactivos (que alcancen la temperatura ambiente )

3.- Agregar en cada tubo los reactivos como se muestran en el siguiente cuadro:

4.- Agitar bien e incubar por 10 min. a temperatura ambiente

5.- Leer la absorbancia A del patrón y de la muestra a 600nm. La coloración es estable por dos horas.

6.- Realizar los cálculos para obtener la concentración de urea en orina utilizando la siguiente fórmula:

A muestra / A Patrón X C patrón X factor de dilución = C muestra

Concentración del patrón: 50 mg/ dl

Cuantificación de Creatinina:

El método a emplear es colorimétrico,  la creatinina presente en la muestra  reacciona con el picrato en medio alcalino originando un complejo coloreado que se lee a una absorbancia de 500 nm.

PROCEDIMIENTO

1.- Diluir la muestra 1:50 con agua destilada

2.- La reacción se debe llevar a cabo en la cubeta de acuerdo a la siguiente tabla

3.- Mezclar  e inserte la muestra en el espectrfotómetro y poner el cronómetro en marcha.