DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CONCENTRACIÓN CELULAR

PRÁCTICA #1

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CONCENTRACIÓN CELULAR

1. OBJETIVO:

• Realizar la determinación cuantitativa de la concentración celular.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO:

Se tiene la necesidad de realizar la determinación de concentración celular, para este objetivo se tiene diferentes métodos, entre estos:

1. Proceso turbidimétrico.
2. Determinación de la masa seca.
3. Determinación del porcentaje de ácido desoxirribonucleico.

En esta práctica se estudiaran los dos primeros. El proceso turbidimétrico basado en la comparación de la absorbancia de una sustancia de concentración desconocida con la de una solución de la misma substancia cuya concentración se conoce y a la cual se denomina solución patrón o estándar.

La absorción de luz por parte de las substancias es una propiedad característica de ellas, que puede ser utilizada para su cuantificación y/o identificación.

Todas las substancias absorben luz en alguna región el espectro electromagnético (visible, UV, IR, etc).

Lambert y Beerdemostraron que la absorbancia (A), también llamada densidad óptica de una substancia es directamente proporcional a la concentración (C) de la substancia absorbente, la longitud (l) del paso de la luz (espesor de la solución) y a una constante denominada coeficiente de extinción especifica (E), que es característico para cada substancia a una longitud de onda ( ) determinada.

A = E*l*C = - log T

Donde T es la transmitancia.

Para  medir la concentración de una substancia se eligen en general la región de máxima absorción del espectro, denominada longitud de onda analítica.

Para realizar estas determinaciones, se realiza previamente una curva de calibrado que consiste en la determinación de la absorbancia o transmitancia de una serie de soluciones de concentraciones conocidas de una misma substancia tratadas con un mismo método y medidas en el mismo instrumento.

1. CÁLCULOS, RESULTADOS Y GRAFICAS:

1. DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN EN EL PROCESO TURBIDIMÉTRICO:

Preparación de la solución madre (2g/l):

[pic 1]

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[pic 11]

Mediante regresión lineal tenemos el siguiente ajuste lineal:

[pic 12]

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Cálculo de la concentración de la muestra madre:

log 1/T = 0,8954 [M] + 0,8181

A = 0,8954 [M] + 0,8181

Dato de laboratorio: A = 1,856

Remplazando datos se obtiene:

(1,856 – 0,8181)/ 0,8954 = [M]

[pic 14]

Para este caso trabajamos con absorbancias negativas:

[pic 15]

Mediante regresión lineal tenemos el siguiente ajuste lineal:

[pic 16]

[pic 17]

Cálculo de la concentración de la muestra madre:

log 1/T = - 0,8954 [M] – 0,8181

A = - 0,8954 [M] – 0,8181

Dato de laboratorio: A = 1,856

Remplazando datos se obtiene:

(1,856 + 0,8181)/ 0,8954 = [M]

[pic 18]

1. DETERMINACIÓN DE LA MASA SECA:

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Masa de los tubos de ensayo (vacíos):

[pic 24]

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