Determinacion De Lactosa En Productos Lacteos

DETERMINACION DE LACTOSA.

La determinación de lactosa según la AOAC también se puede realizar por método espectrofotométricos (16051, AOAC, 1984) o enzimáticos (16059, AOAC, 1984).

Procedimiento. Colocar en un matraz de 100 ml, 10 ml de leche exactamente medidos, diluir con 60-80 ml de agua destilada, agregar 5 ml del reactivo de Courtonne (subacetato de plomo al 30 %), agitar enérgicamente y llevar a 100 ml con agua destilada; homogeneizar y filtrar por papel. Valorar la lactosa en el líquido filtrado utilizando el método de Fehling-Causse-Bonnans.

Valoración por el método de Fehling-Causse-Bonnans modificado (AOAC 1965, p. 495) a) Valoración del reactivo: En un erlenmeyer de 250 ml de capacidad se colocan exactamente 10 ml de reactivo FCB, 30 ml de agua destilada y 2 o 3 trozos de porcelana porosa y se calienta a ebullición. Una vez alcanzada ésta, se comienza a agregar desde la bureta la solución patrón de azúcar a una velocidad de goteo controlada (medirla) evitando interrumpir la ebullición. Cuando la coloración azul del reactivo disminuye de intensidad o alcanza un tono celeste verdoso, se agregan 3 gotas de la solución acuosa de azul de metileno y se continúa con el agregado de solución patrón, gota a gota, hasta decoloración. La primera gota que torna a amarillo oro parte de la solución indica el punto final. Se debe realizar esta valoración por duplicado.

Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la solución patrón para decolorar 10 ml de reactivo de FCB. Si el volumen gastado cae fuera de estos valores hay que modificar la velocidad de adición hasta lograr el valor indicado. La velocidad de goteo encontrada como óptima será la empleada al valorar las soluciones problema.

b) Valoración de glúcidos solubles reductores: Se titulan 10 ml de reactivo FCB según el procedimiento seguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solución de azúcares solubles obtenida a partir de la muestra (filtrado). El gasto de esta valoración debe estar comprendido entre 3 y 8 ml, si no es así hay que modificar la concentración de la solución de azúcares.

Nota 1: Es conveniente que el agregado de solución de azúcares (patrón y problema) se haga al principio a razón de 1 gota/seg y después del agregado de azul de metileno, a 1 gota/3 seg.

Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observación del punto final de la titulación, pues la coloración amarilla cambia rápidamente a parda.

c) Glúcidos solubles reductores previa hidrólisis ácida: En vaso de precipitado de capacidad conveniente, se colocan 50 ml del filtrado preparado para determinar glúcidos directamente reductores (punto b), se agregan 1-2 ml de HCl puro (:1,19), se lleva a baño María por espacio de 30 min, se neutraliza con solución de NaOH o con NaHCO3 sólido y se lleva al volumen inicial (50 ml) con agua destilada. Filtrar

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