Determinación de aflatoxinas en productos derivados de cereales de consumo humano en Mercados de Trujillo (Perú)

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Artículo Original 

Determinación de aflatoxinas en productos derivados de cereales de consumo humano en Mercados de  Trujillo (Perú)

Determination of aflatoxins in cereal products for human consumption in markets from Trujillo (Peru)

Nancy Mejía Acuña1, Pedro Alvarado Salinas2 y Nelly Vásquez Valles2

1Tesista, Escuela AP de Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo (UNT). Trujillo. Perú.

2Departamento de Microbiología y Parasitología. UNT

RESUMEN

Se determinó la presencia de aflatoxinas en productos derivados de cereales de consumo humano que se expenden en los mercados de la ciudad de Trujillo (Perú), mediante un test de ELISA competitivo con un detector espectrofotométrico a una longitud de onda de 450 nm. Se analizaron 47 muestras elegidas al azar de derivados de cereales correspondientes a harina de maíz, trigo y avena adquiridos en los mercados de la Hermelinda, Central, Zonal Palermo y Unión de la ciudad de Trujillo. Las las aflatoxinas fueron extraídas con alcohol metílico. Se determinó la presencia de aflatoxinas sólo en dos muestras de harina de maíz  (12.5%), con niveles  de 1.0 ug/kg y 1.2 ug/kg (el valor máximo aceptado en la mayoría de países de 20 ppb).  

Palabras clave: aflatoxina, maíz, trigo, avena, ELISA

ABSTRACT

Aflatoxins in cereal products for human consumption that are sold in the markets of the city of Trujillo, using a competitive ELISA test with a spectrophotometric detector at a wavelength of 450 nm was determined. 47 samples of corn flour, wheat and oats were tested, from which aflatoxin extracted with methyl alcohol. Samples from three different raw materials (wheat flour, corn and oats) used as food for human consumption that are sold in markets Hermelinda, Central, Zonal and Palermo Union Trujillo was performed. Aflatoxins in only two samples of maize flour (12.5%), with levels of 1.0 ug / kg and 1.2 ug / kg was determined to be the maximum value accepted in most countries of 20 ppb.

Keywords: aflatoxin, corn, wheat, oats, ELISA Test

INTRODUCCIÓN

De las cuatro aflatoxinas principales (B1, B2, G1 y G2), la que se observa habitualmente en mayores concentraciones en alimentos para animales así como en maíz, algodón y maní es la B; ocasionalmente, A. flavus y A. parasiticus pueden colonizar pequeños granos de cereales como cebada, avena y trigo y, de este modo, producir niveles de aflatoxinas de bajos a moderados1,2,4,5,6.    

Las aflatoxinas se han asociado a varias enfermedades como la aflatoxicosis tanto en animales domésticos como en seres humanos y han recibido más  atención que cualquier otra micotoxicosis debido a su potente efecto carcinógeno6,7,8,9,10,11,12. Pueden encontrarse como contaminantes naturales en los cereales (esencialmente en el maíz, trigo, arroz y sorgo) y subproductos de cereales, harinas de oleaginosas (algodón, cacahuete, colza, coco, girasol y otros), frutos secos y productos de salchichería, especias, leguminosas, vinos, frutas, leche y derivados1,3,8,13,14,15,16,17,18.  

La Food and Agricultura Organisation (FAO) estima que más de un 25%  de alimentos en el mundo está contaminado con cierto número de micotoxinas y la presencia de aflatoxinas en los cereales está asociada, tanto a las condiciones de almacenamiento inadecuadas, como a la contaminación del producto en el campo, antes y después de la cosecha6,8,19,20,21.  

En la costa peruana es frecuente el uso de cereales en la alimentación: diariamente se utiliza la harina de maíz y de trigo en la preparación de pan y pasteles y la avena en forma directa; por ello, es importante contar con la correspondiente legislación y programas de control de contaminantes naturales de los alimentos como factores de riesgo para enfermedades como el cáncer de hígado. La Unión Europea, por ejemplo, cuenta con dicha legislación (Official Journal of the European Union, 2003) que estalece que los niveles máximos admisibles están entre 2 a 8 µg/kg para AFB1 y de 4 a 15 µg/kg para la sumatoria de las cuatro aflatoxinas (AFB1+AFB2+AFG1+AFG2), dependiendo de los diferentes alimentos (maní, frutos de cáscara, frutos secos y productos derivados de su transformación, cereales y productos derivados de su transformación) y en el caso de alimentos infantiles y alimentos elaborados a base de cereales para lactantes y niños de corta edad y alimentos dietéticos destinados a usos médicos especiales dirigidos específicamente a los lactantes, la concentración máxima permitida de AFB1 es de 0,10 µg/kg22,23,24,25.

Conocidas desde 1960, las aflatoxinas han sido detectadas en varios países con porcentajes variables9,22. En el Perú, se determinó la presencia de aflatoxinas en el 32% de varias especies de cereales16 siendo éste uno de los pocos antecedentes sobre el particular. Ello condujo a la ejecución de la presente investigación dirigida a determinar la presencia de aflatoxinas en productos derivados de cereales de consumo humano que se expenden en los mercados de la ciudad de Trujillo (Perú) y considerando que las aflatoxinas han sido reportadas como los contaminantes naturales de alimentos más peligrosos para la salud humana y están  clasificadas como cancerígenos Clase 1 por la Agencia Internacional de Investigaciones sobre Cáncer (IARC).  

MATERIAL Y MÉTODOS

Material de Estudio

Se obtuvo, al azar,  47 muestras de 250 g cada una,  de avena, harina de maíz y trigo que se expenden los mercados de la Hermelinda, Unión, Central y  Zonal Palermo de la ciudad de Trujillo (Perú), en los que no se observaron alteración aparente Tabla 1).  

Recolección y procesamiento 

Las muestras fueron recogidas y procesadas de acuerdo a las técnicas sugeridas en el método RIDASCREEN®FAST Aflatoxin Total que  es un inmunoensayo enzimático competitivo para el análisis cuantitativo de aflatoxina en cereales y alimentos para animales (raciones balanceadas). Las muestras se colocaron en bolsas plásticas transparentes de primer uso debidamente rotuladas y posteriormente se llevaron al Laboratorio de Microbiología y Tecnología de alimentos de la Facultad de Ciencias Biológicas, de la Universidad nacional de Trujillo, para ser analizadas.  

Detección de aflatoxinas

Método inmunoenzimático RIDASCREEN®FAST Aflatoxin Total  

Extracción27, 28 

Se pesaron 5 g de la muestra y se mezcló con 25 ml de metanol al 70%, agitándose por 3 minutos. Luego, el extracto fue filtrado a través de un papel Whatman Nº1. Luego se diluyo 1ml del filtrado con 1ml de agua destilada. Se utilizó 50 ul del filtrado diluido por  micropozo en el test.

Proceso 29, 30 

• Se llevaron todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25o C) por 30 minutos antes de ser utilizados.
• Se colocaron suficientes micropozos en el marco portamicropozos para el estándar y para las muestras analizar.  
• Se agregó 50 µl del estándar y de las muestras a analizar a los micropozos correspondientes.  
• Se utilizó una punta de micropipeta nueva para el estándar y para cada muestra.
• Se agregó 50 ul del conjugado aflatoxina-enzima a los micropozos correspondientes.
• Luego se agregó 50 ul del anticuerpo anti-aflatoxina a cada micropozo.
• Se mezcló el contenido de la microplaca suavemente y se incubó durante 5 minutos a temperatura ambiente.
• Después se vació los micropozos y luego se golpeó enérgicamente (tres veces consecutivas) el marco portamicropozos sobre un papel absorbente limpio y asegurarnos la eliminación de retos líquidos.
• Los micropozos fueron lavados con agua destilada utilizando una botella de lavado, nuevamente se vació los micropozos de la forma ya indicada.
• Se repitió este paso dos veces más.
• Posteriormente se agregó 100 ul del substrato/ cromógeno a cada micropozo.  
• Luego se mezcló el contenido suavemente y se incubó 5 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente (20-250 C).
• Después se agregó 100 ul de reactivo de parada a cada micropozo.
• Se mezcló suavemente y se midió la absorción a 450 nm en el transcurso de los siguientes minutos

Tabla 1. Número de muestras y pesos de avena, harinas de maíz y trigo obtenidas de los mercados de la Hermelinda, Unión, Mayorista y Central de la ciudad de Trujillo (Perú).

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