Fijacion Tislar

Fijación tisular

Consiste en interrumpir los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular, tratando de conservar la arquitectura y composición tisular lo próxima posible a como se encontraba en el organismo vivo.

Fenómenos degradativos que llevan a la completa destrucción del soporte material de los seres vivos

• Autólisis: autodigestión enzimática celular, debido a la salida del contenido lisosómico al citoplasma.

• Putrefacción: efecto ejercido por toxinas y enzimas bacterianas sobre los tejidos (microorganismos de tipo saprófitos).

El objetivo de la técnica histológica es conseguir la mayor similitud posible entre la imagen real y la imagen equivalente.

• IMAGEN HISTOLÓGICA REAL: es la que tiene el tejido cuando aún se encuentra vivo

IMAGEN HISTOLÓGICA EQUIVALENTE: es la obtenida después de la manipulación histológica que comprende la fijación, inclusión, corte y coloración.

Condiciones de la imagen equivalente

• Constancia: ha de observarse en todos los tejidos idénticos obtenidos de distintos individuos de una misma especie animal.

• Su reproductibilidad en todas las preparaciones histológicas obtenidas a partir de dichos tejidos independientemente del proceso de fijación empleado.

Principios generales de la fijación

• No existe un método universal de fijación.

• No todos los fijadores conservan indefinidamente los tejidos.

• Un defecto de la fijación jamás puede ser corregido.

• Es imposible realizar un estudio histológico sobre un material con defectos de fijación

Tipos de fijación

Según las características del estudio microscópico que se vaya a realizar:

• FIJACION HISTOLÓGICA O CITOLÓGICA: conservación de la arquitectura y estructura de los tejidos y células.

• FIJACIÓN HISTOQUÍMICA: conservación de la composición molecular y bioquímica de los tejidos.

Según las fases de la fijación:

• FIJACIÓN PRIMARIA: es la que se realiza de forma inmediata sobre el tejido fresco.

• FIJACIÓN SECUNDARIA O REFIJACIÓN: consiste en colocar el tejido ya fijado en un segundo fijador para demostrar algún componente tisular específico o simplemente para intensificar la fijación inicial.

Clases de agentes fijadores según su mecanismo de actuación

• Fijadores por métodos físicos: En este se emplea el enfriamiento por congelación del tejido como método para detener la autolisis y putrefacción tisular.

• Fijadores por métodos químicos: Los agentes fijadores generalmente en forma líquida actúan desnaturalizando e insolubilizando las proteínas tisulares lo cual bloquea la autolisis por inactivación enzimática.

Congelación

La clave de una fijación por congelación del tejido radica en que su realización sea instantánea, ya que un enfriamiento lento provoca la formación de microcristales intracelulares.

Criodesecación:

Se trata de congelar a una temperatura inferior a -50ºC y eliminar el agua a una presión baja.

Criosustitución:

Se fundamenta en la sustitución lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por líquido fijador que en ocasiones puede actuar simultáneamente como medio de inclusión.

Características de un líquido fijador ideal

• Capacidad para bloquear de inmediato la autolisis: cuando mayor sea esta capacidad, mejor será el agente fijador.

• Efecto microbicida, de forma que la actividad enzimática del tejido quede paralizada.

• No provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que determinen anomalías en su arquitectura.

• Inducción de cambios en la textura y composición tisular que favorezcan la inclusión, corte y coloración del material histológico.

Reglas generales a considerar en el empleo de líquidos fijadores

• Rapidez al colocar el líquido fijador.

• El tejido debe estar seccionado en láminas de 0.5mm de espesor máximo.

• La relación entre el volumen de fijador y el de la pieza debe ser de 20 a 1.

• La presión osmótica del fijador y de la pieza deben ser equivalentes, si es necesario debe compensarse la presión osmótica con soluciones salinas.

• El pH del líquido fijador debe aproximarse al pH fisiológico.

• El tiempo de fijación es específico para cada fijador.

Lavado posfijación

Es el aclarado que se realiza después del proceso de fijación para eliminar los residuos del agente fijador.

Líquidos fijadores simples

• Fijadores por deshidratación tisular: Por ser sustancias altamente higroscópicas, actúan eliminando tanto el agua libre como el agua ligada a las moléculas proteicas, de forma que estas últimas se precipitan a través de un proceso equivalente al de floculación de los coloides.

Ejemplo: Alcohol etílico.

• Fijadores por cambio en el estado coloidal de las proteínas: Todos los fijadores contemplados en este grupo son de carácter acido, se emplean formando parte de mezclas fijadoras y poseen una gran velocidad de penetración en los tejidos y algún poder de decalcificación.

Ejemplo: Ácido acético.

• Fijadores que actúan por formación de sales con los tejidos: En estos casos el fijador es un catión metálico fundamentalmente cromo o mercurio, o un derivado orgánico como el ácido pícrico, que son susceptibles de formar con los tejidos proteinatos metálicos o picratos. Por lo general, todos los agentes de este grupo poseen gran velocidad de penetración y fijación, porque la formación de sal se produce instantáneamente.

Ejemplo: Cloruro de mercurio.

• Fijadores que actúan por reticularización de las proteínas: El proceso que denominamos reticularización de las proteínas sobreviene cuando la desnaturalización de éstas moléculas se produce no por precipitación, sino porque el agente que provoca el fenómeno induce la rotura masiva de los puentes de hidrógeno determinantes de la estructura helicoidal de las moléculas proteicas, con la formación posterior de una malla reticular polipeptídica por asociación química entre los grupos activos desenmascarados por el líquido fijador.

Ejemplo: Formol.

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