Informe de biología-morfología celular

MORFOLOGÍA CELULAR.

DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD METABÓLICA DE  MICROORGANISMOS AMBIENTALES.

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Jane Estacy Herrera Mendoza [pic 2]

Facultad de ingeniería. Universidad de Antioquía-Sede Tulenapa-Carepa Antioquia, jheisy7@gmail.com, septiembre 21 de 2015.

RESUMEN

En esta práctica observamos los medios de cultivos que habíamos preparado la clase pasada, tanto macroscópica como microscópicamente y al sacarlos de la incubadora  nos dimos cuenta que algunas muestran no había quedado bien hechas, pues tenían gusanos y estos se comen las bacterias y lo hongos que pretendíamos observar, así que, tomamos las muestras de otros compañeros que habían quedado bien hechas. Primero las observamos macroscópicamente en el estereoscopio, identificando características como: notación, forma, borde, elevación, superficie, color, olor y tipo de microorganismo. Un ejemplo, es el medio de cultivo para hongos, el cual la notación es chancles, forma: filamentosa, borde: filamentoso, elevación: acuminada, superficie: seca, color: blanco, olor: ninguno y tipo de microorganismo: hongo.

Luego los observamos microscópicamente en el microscopio identificando las diferentes características en  hongos y bacterias, pero para observarlas se tenía que hacer primero la preparación del frotis y luego la tinción de las muestras, donde se revelaban las diferentes bacterias si eran Gram positivas o Gram negativas  y los hongos que habían en los cultivos.

PALABRAS CLAVES: Medios de Cultivos, colorantes, morfología, bacterias Gram, Hongos.

INTRODUCCIÓN

La observación de los microorganismos se valora en dos aspectos: El aspecto macroscópico, en el que se evalúa color, forma y tamaño de las colonias y el aspecto microscópico en el que se evalúa la forma, el tamaño y propiedades de la pared del microorganismo como tal.

Estas apreciaciones permiten determinar aspectos como: Pureza del cultivo, ya que las colonias observadas deben ser de un solo tipo, la morfología microscópica debe presentar uniformidad en el tamaño, absorción de la coloración y forma de los microorganismos evaluados., la composición de la pared, ya que la coloración de Gram utilizada para la observación microscópica, da cuenta de los componentes presentes en la pared celular; puesto que al ser negativa el microorganismo en esta tendría mayor porcentaje de lipopolisacáridos, mientras que al ser positiva, indicaría que el microorganismo en esta estructura presenta mayor porcentaje de péptidoglicanos.y la viabilidad, dado que la observación en fresco, permite ver el movimiento microbiano, y por último se realizan las pruebas bioquímicas que permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de identificación, a continuación revelaremos esas las características tanto microscópica como macroscópicamente.

MATERIALES Y EQUIPO

• Cajas Petri con agar nutritivo con colonias.
• Colorantes Gram.
• Mecheros
• Microscopio
• Estereoscopio
• Porta objetos
• Cubre objetos
• Aceite de inmersión
• Cajas Petri con medios de cultivo específicos incubados
• Lugol.
• Ácido clorhídrico al 1%
• Asa
• Agua
• Alcohol

MÉTODOS

A continuación mencionaremos los métodos utilizados para la observación y caracterización de los cultivos realizados, para estos métodos se utilizaron 2 sesiones.

SESION 1.

En esta sección  se hizo la caracterización macroscópica y microscópica:

En la caracterización macroscópica se realizó una  primera descripción de las colonias formadas en la caja Petri y posteriormente, utilizando el estereoscopio realizamos una segunda descripción  de las colonias teniendo en cuenta la morfología  de las colonias de los microorganismos: Notación, esquema, forma, borde, elevación, superficie,  color, olor y tipo de microorganismo.

Luego realizamos la preparación del frotis  (Para prueba de gram)  que consiste en lo siguiente:

1. Tomar un portaobjetos limpio y etiquetarlo con el nombre del medio del cultivo del cual se sacó si fue del baño, de la mesa de trabajo, del aire, de la piel, etc.

2. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo.

3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos. Después acercar la caja Petri al mechero, introducir el asa en la caja y tomar cuidadosamente la muestra.

4. Tomar el asa con la muestra y mezclarla con el agua que previamente se había depositado en el portaobjeto. Extenderla suavemente y dejarla unos minutos secar al aire.

5. Fijar la muestra con calor. Para esto se pasa el frotis rápidamente  de 2 a 3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero.

6. Palpar la parte inferior del portaobjeto con el dorso de la mano para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.

Despúes para observar los microorganismos se tenia que hacer una tinción teniendo en cuenta los microorganismos:

• Tinción en fresco:

Se utiliza para hongos y levaduras (con cristal violeta, azul de metileno), micro algas (lugol), células vegetales, o bacterias coloreadas.

 Se realiza un frotis, el cual consiste en tomar con un asa una muestra de la colonia, y esparcirla en el portaobjetos, previamente humedecido con una gota de agua, realizando movimientos horizontales. Se adiciona una gota de colorante a la muestra fresca.

• Tinción de Gram

Luego de la fijación de la muestra se procede con los siguientes pasos:

1. Teñir con cristal violeta durante 30 segundos.

2. Retirar el colorante con agua

3. Cubrir con lugol durante 1 minuto

4. Lavar con agua

5. Decolorar con alcohol cetona

6. Contrastar con safranina durante 20 segundos

7. Lavar con agua

8. Secar el exceso de agua

Por último observamos en el microscopio teniendo en cuenta lo siguiente:

1. Limpiar cuidadosamente los objetivos y el ocular del microscopio con papel seda.

2. Ajustar el haz de luz en el centro del campo de observación, siguiendo las indicaciones del profesor.

3. Colocar los portaobjetos en la platina y empezar a localizar la preparación con el objetivo de 10X, posteriormente pasar al de 40X. Para la observación con el objetivo de 100X, colocar previamente una pequeña gota de aceite de inmersión sobre la preparación.

4. Al finalizar las observaciones, limpiar cuidadosamente el objetivo con papel seda para eliminar el exceso de aceite y evitar incrustaciones que dañan estos sistemas.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Las muestras analizadas se observaron en el microscopio en el objetivo 100X.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En esta práctica logramos identificar las características morfológicas de las colonias utilizando el método de coloración de Gram, que resulta importante al momento de observarlas en el microscopio pues debido a su tamaño son difíciles de ver y gracias a la tinción que realizamos, observamos las colonias Gram negativa que poseen color rojo y forma alargada y las Gran positivas que son de color violeta y de forma circular. Clasificamos microorganismos de acuerdo con las características morfológicas, ejemplo, el medio de cultivo para las bacterias, cuya notación es aire, forma: puntiforme, borde: entero, elevación: convexa, superficie: rugosa, color: blanquecino, olor: ninguno y tipo de microorganismo: bacterias. Cabe citar que es importante saber preparar el medio de cultivo y tener en cuenta factores que influirán en él, pues al no tenerlos en cuenta se tendrán resultados no deseados, como ejemplo lo sucedido con algunos cultivos dañados que resultaron llenos de gusanos los cuales impiden el crecimiento de hongos y bacterias ya que se los comen, esta situación refleja que el cultivo no se realizó adecuadamente.

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