Ingeniería Bioquímica Microbiología

Ingeniería Bioquímica

Microbiología

MC. ALICIA CARDOS VIDAL

Practica Nº 3

ASA ACODADA, (MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE LAS COLONIAS)

Alumna:

LENNY MARISOL TREJO PACHECO

Equipo:

LENNY MARISOL TREJO PACHECO

MARIA ELENA HEREDIA LOPEZ

IRMA ANGELICA JIMENEZ

Fecha de entrega: 19/05/2015

Práctica N° 3

Asa acodada, morfología macroscópica de las colonias.

INTRODUCCIÓN:

En esta práctica se pondrá utilizar los conocimientos adquiridos con anterioridad, se requerirá de la agilidad para preparar soluciones, medirlas y esterilizar los materiales, el uso de las pipetas será de mucha importancia ya que cada uno de los pasos a realizar tiene involucrados a este utensilio. Se harán diluciones y serán depositadas en distintos tubos de ensaye. Cada uno de los tubos tendrá una previa estimación que irá de los    hasta los  (excluyendo -2,-5,-8)[pic 2][pic 3]

METODOLOGÍA GENERAL

Materiales y equipo

• 1 Gradilla
• 1 Agitador
• 2 Matraces Erlenmeyer de 250 ml
• 1 Probeta de 100 ml
• 1   de tela de gaza[pic 4]
• 7 pipetas
• 1 Pizeta con agua destilada
• 7 tubos de ensaye
• 12 cajas Petri
• 1 asa acodada
• 1 Pinza
• Algodón plisado
• 1  de Papel estraza [pic 5]
• 1 Mechero Fisher
• Tijeras
• Balanza analítica
• 1 Espátula
• Muestra (jugo de chaya con piña)

Reactivos

• Agar PDA 5.85 g
• NACL 0.085 %
• Agar Nutritivo 3.45 g

PROCEDIMIENTO

Preparación del material  para el medio de cultivo.

• Con un magitel y un poco de alcohol se limpió la mesa de laboratorio donde se va a trabajar  para eliminar residuos de algo que se allá derramado y trabajar en un área limpia, de igual manera para evitar que nuestro cultivo se contamine.

• Se lavaron los tubos de ensayo con rosca y sin rosca para eliminar residuos que se pudieran encontrar, y se dejaron escurrir en una gradilla para eliminar el exceso de agua.

• Posteriormente realizamos unos tapones con algodón y gasa para tapar los tubos de ensayo antes de ser esterilizados. Los tapones se hicieron con algodón y gasa, se utilizó una pinza también. Primero se agarra una porción de algodón, se da vueltas en la pinza si compactarlo. Se corta un pedazo de gasa a un tamaño con espacio extra al  de la boquilla de los tubos de ensayo la gasa por encima de las boquillas se hunde con la pinza que tiene algodón, se procede a cortar cuatro esquinas para después amarrar los extremos de manera vigorosa.

• Con una espátula y un pedazo de aluminio se pesar .86g de NaCl en una balanza analítica.

• Se puso 100ml de agua  en una Probeta de 100ml ya sea destilada o de tubo.

• Se mezcla .86g NaCl y los 100ml de agua y se  prepara una solución isotónica al 85% normal.

• Se tomaran los siete tubos de ensayo ya colocaron en la gradilla y luego con una pipeta de 10ml se tomó 9 ml de solución. En el primer tubo se agregó 9ml de la solución, después en el segundo tubo se agregó 9.9 ml de la solución, en el siguiente tubo que es el tercero se agregó 9 ml de solución, en el cuarto tubo se agregó 9.9 ml de solución, en el quinto tubo 9 ml de solución y en el sexto se agregó 9.9 ml de la solución. [pic 6]

• Luego se etiquetaron los tubos correlativamente el primer tubo será de 10ˉ1, el segundo de 10ˉ3, el tercero de 10ˉ4, el cuarto de 10ˉ6, el quinto de 10ˉ7 y el sexto de 10ˉ9. Una vez listo nuestros tubos se pusieron en un vaso de precipitado y se puso  en el autoclave por 2 horas a 121°C para su esterilización.

• Seguidamente tan pronto como se saca de la autoclave se colocaron en la gradilla y se dejó reposar un tiempo de 24 horas.

• Después de determinado tiempo se prosiguió con la práctica depositando con una pipeta de 1ml se agregó 1 ml de la muestra recolectada (Jugo de chaya con piña) en el primer tubo(10ˉ1), y se agito, luego se agarró otra pipeta ya estéril y se tomó 0.1ml del primer tubo y se depositó en el segundo tubo (10ˉ3) de igual manera se agito, después se tomó 1ml del segundo tubo y se depositó en el tercer tubo (10ˉ4) y se agito nuevamente, luego se tomó 0.1 ml del tercer tubo y se depositó en el cuarto tubo (10ˉ6), seguidamente des cuarto tubo se tomó 1 ml para ser depositado en el quinto tubo (10ˉ7) y por último se tomó 0.1ml del quinto tubo y se depositó en el sexto tubo (10-9) y se agito, se debe tener en cuenta que en base a cada tubo de ensayo se utilizó una pipeta de 1ml distinto, para evitar  concentraciones erróneas y que se contamine.

ASA ACODADA.

• Mechero Fisher
• Papel estraza
• Cinta masking tape
• Tijeras
• Cajas Petri
• 1 asa acodada.

PROCEDIMIENTO.

• Primero se encendió el mechero bunsen con un encendedor, para que el hare se encuentre con calor y por consiguiente sea un área estéril, previniendo de cualquier contaminación.

• Luego con el asa acodada en la mano se pasa a través de la flama del mechero bunsen para eliminar cualquier residuo.

• Después se dejó por unos segundo esperando a que enfrié pero siempre manteniendo cerca del calor del mechero.

• Seguidamente se tomó una caja Petri contenido de agar nutritivo que ya se encuentra gelificado, se le agrego 1 ml de la dilución 10ˉ1 y teniendo el asa acodada en la mano se esparció por toda la caja Petri de manera circular de tal modo que cubra todo el círculo de la caja.

• Luego se tomó otra caja Petri contenido de PDA gelificado y se le agrego 1 ml de la disolución 10ˉ1 y con el asa acodada se esparció de manera circular por toda la caja.

• Después se tomó otra caja Petri con agar nutritivo gelificado repitiendo el proceso pero con la dilución de concentración que le sigue (10ˉ3,10ˉ4, 10ˉ6, 10ˉ7, 10ˉ9) prosiguiendo de la misma manera con las demás diluciones de las concentraciones posteriores.

• Luego se tomó otra caja Petri con PDA gelificado y de igual manera se repitió el proceso anterior con las diluciones siguientes a la 10ˉ1 (10ˉ3, 10ˉ4, 10ˉ6, 10ˉ7, 10ˉ9).

• Teniendo listas las cajas se continuo envolviéndolas con papel estraza, se cortó el papel de 30cm por 20cm para que la caja se pueda envolver de manera adecuada sin exponerse a la contaminación, se tomó cada extremo del papel y se doble hasta llegar a la caja los otros extremos se doblaron hacia adentro y enseguida hacia la parte trasera de la caja luego las puntas se pegaron con cinta masking tape.

• Concluyendo ya teniendo las cajas envueltas de manera correcta se almacenaron por 24 horas para el crecimiento de los microorganismos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Debido a que la disolución 10ˉ1 y 10ˉ3 son  de concentración mayor a las demás, las bacterias eran incontables por lo tanto su morfología no era apreciada, en la de dilución 10ˉ4 si se podían contar pero eran bastantes, de igual manera si se podía apreciar su morfología.

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