LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA MÉDICO CIRUJANO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II

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• GRUPO: A
• LABORATORIO:  L1
• DOCENTE DE LABORATORIO:
• Dr. Luis Roberto Alarcón Morales
• Alumno Jesús David Pérez Hechem 172561
• Practica 4 Bacteriófagos

                      BACTERIÓFAGOS                      Práctica #4[pic 2]

Resumen:

Durante la realización de esta práctica se analizaron los bacteriófagos previamente con el conocimiento teórico adquirido estos fueron estudiados mediante su presencia dentro del suero sanguíneo de acuerdo con diferentes procedimientos, es decir que dentro del objetivo de esta práctica fue el aprender a manejar los fagos en el laboratorio y conocer la importancia que tienen en la microbiología además de conocer su estructura y acción.

Introducción:

Un bacteriófago, o de manera breve, fago, es un virus que infecta a las bacterias. Como otros tipos de virus, los bacteriófagos varían mucho en su forma y material genético. Los genomas de fagos pueden constar de ADN o ARN, y pueden contener tan solo cuatro genes o cientos de genes. La cápside de un bacteriófago puede ser icosaédrica, filamentosa o en forma cabeza-cola. La estructura cabeza-cola parece ser exclusiva de los fagos y sus parientes cercanos.

        Los bacteriófagos se pueden multiplicar mediante dos mecanismos alternativos: el ciclo lítico o el ciclo lisogénico. El ciclo lítico culmina con la lisis y la muerte de la célula huésped, mientras que la célula huésped permanece viva en el ciclo lisogénico.

        Ciclo Lítico: el bacteriófago secuestra a su célula anfitriona y utiliza los recursos de la célula para hacer muchos fagos nuevos, lo que causa que la célula estalle y muera en el proceso. Consta de 5 etapas:

1. Fijación. Un sitio de fijación del virus se adosa a un sitio receptor complementario en la célula bacteriana. Esta fijación es una interacción química en la cual se forman enlaces débiles entre los sitios de fijación y receptor.
2. Penetración. El bacteriófago inyecta su DNA en la bacteria. Para ello la cola del bacteriófago libera una enzima, la lisozima del fago, que degrada una porción de la pared de la célula bacteriana.
3. Biosíntesis. Se copia el ADN del bacteriófago y sus genes se expresan para hacer proteínas, como las proteínas de la cápside.
4. Maduración.         Las copias de ácido nucleico y de proteínas virales se agrupan formando nuevos virus
5. Liberación. El bacteriófago expresa los genes para las proteínas que hacen agujeros en la membrana plasmática y la pared celular. Los agujeros dejan que, entre agua, y hacen que la célula se expanda y estalle.

Ciclo Lisogénico. En este los primeros dos pasos (fijación y penetración) ocurren tal como sucede en el ciclo lítico. Sin embargo, una vez que el ADN del bacteriófago está dentro de la célula, no se copia ni se expresa inmediatamente para hacer las proteínas. En cambio, se recombina con una región particular del cromosoma bacteriano. Esto hace que el ADN del bacteriófago se integre al cromosoma. El bacteriófago con el ADN integrado, llamado profago, no es activo: sus genes no se expresan y promueve la producción de bacteriófagos nuevos. Sin embargo, cada vez que una célula anfitriona se divide, el profago se copia junto con el ADN anfitrión, sin hacer esfuerzo alguno. El ciclo lisogénico es menos llamativo y violento que el ciclo lítico. En las condiciones apropiadas, el profago puede volverse activo y salirse del cromosoma bacteriano, lo que acciona los pasos restantes del ciclo lítico (copiado del ADN y síntesis de proteínas, ensamblado del fago y lisis). (Peláez Carvajal, et.al., 2016).

Materiales y métodos:

Para esta práctica se realizó un cultivo dentro de un agar-cerebro-corazón, en el cual se sembró E. Coli mediante la técnica de estría cerrada con un hisopo esterilizado, marcando previamente 4 puntos en la caja Petri de manera que estos fueron los indicadores de localización, posterior a esto se añadió una gota de colifago a cada uno de los puntos marcados y se mantuvo en incubación a 37 grados Celsius por 24 horas.

Posteriormente se colocaron 6 tubos dentro de una gradilla; dentro del tubo 1 se agregaron 4.5 ml de solución fisiológica y 0.5 ml de bacteriófago mediante una pipeta de 5 ml y una propipeta de 5-10 ml, respectivamente; dentro del tubo 2 se agregaron 0.5 ml del contenido del tubo 1, dentro del tubo 3 se colocó 0.5 ml del tubo 2, dentro del tubo 4 se agregaron 0.5 ml del tubo 3, 0.5 ml del tubo 3 al tubo 4, 0.5 ml del tubo 4 al tubo 5, 0.5 ml de tubo 5 al 6 y del tubo 6 se desechan 0.5 ml. Posterior a este procedimiento se toman 100 microlitros de cada uno de los tubos y 100 microlitros de E. Coli y esto se lleva a incubar 20 min a 37 grados Celsius, finalmente a cada uno de los tubos se le coloca 4.5 ml de agar-cerebro-corazón con una pipeta de 5 ml y una propipeta de 5-10 ml, inmediatamente a eso se vació cada uno de los tubos en cajas Petri y fueron marcados como 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:00000, 1:000000 y se mantuvieron en incubación durante 1 semana.

Se rotularon 5 tubos de ensaye con cada una de las diluciones que se llevaron a cabo a continuación. En estos tubos se procedió a realizar una serie de diluciones agregando 4.5ml de solución fisiológica en cada uno de los tubos. Al tubo 1 se le agrego 5ml de otro tubo muestra el cual contenía caldo cerebro corazón (4.5ml) con fago (.5ml) para realizar una dilución de 1:100. Del tubo 1 (1:100) se obtuvo .5ml de este y se vació en el tubo 2 para obtener una dilución de 1:1000. Se obtuvieron .5 ml, nuevamente, pero ahora del tubo 2 y se vació en el tubo 3 para una dilución de 1:10000. Se obtuvo .5 ml del tubo 3 y se vació en el tubo 4 resultando una dilución de 1:100000. Finalmente se obtuvo .5ml del tubo 4 y se vació en el tubo 5 para tener una dilución de 1:1, 000,000. Una vez terminado lo anterior se procedió a transferir .1ml de cada dilución a otro con .1ml de E. Coli. Una vez realizado esto se llevó esta última serie de tubos a la incubadora, la cual estaba a una temperatura de 37°C y se incubo durante 20 minutos. Transcurrido este tiempo se le agrego a cada tubo 4ml de agar caldo cerebro blando que se encontraba a una temperatura de 40°C y una vez agregado estos 4ml se vaciaron en agares Mueller Hinton previamente también marcados con cada una de las diluciones a vaciar de una manera rápida. Se dejó solidificar y se incubo a 37°C durante 24hrs para observar el crecimiento. Ya teniendo el crecimiento bacteriano, se utilizó la formula

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