Microbiologia

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

TINCIÓN DIFERENCIAL ÁCIDO RESISTENTE

Informe N°03

INTEGRANTES:

20101475 Condori, Gabriela

20101481 Guanilo, Diego

20101502 Varas, Miguel

PROFESOR:

Ramos, Roberto

FECHA DE INICIO: Jueves 20 de setiembre

FECHA DE ENTRAGA: Jueves 27 de setiembre

MESA: 01

2012

I. INTRODUCCION

La tinción diferencial ácido resistente es utilizada para la identificación de bacterias del género Mycobacterium, las cuales tienen un alto contenido en lípidos de la pared celular y presentan un tipo específico de ácidos grasos llamados ácidos micólicos, los cuales les confieren una alta hidrofobicidad y la propiedad de ácido resistencia. Por ello su tinción requiere un tratamiento con altas temperaturas y colorantes afines como el carbolfucsina, los cuales no son decolorados por la acción del alcohol ácido.

Las endosporas son estructuras especiales y resistentes, que se mantienen en estado de latencia para poder sobrevivir por largos periodos en ambientes desfavorables para el crecimiento de la célula vegetativa, como condiciones extremas de alta o baja temperatura o bajo la acción de agentes químicos. Cuando esto sucede las especies del género Bacillus y Clostridium producen en su interior dicha estructura.

Las endosporas poseen una pared celular especialmente consistente rodeada de una serie de capas hidrofóbicas exteriores con una estructura muy organizada, así como ciertos compuestos químicos exclusivos entre los seres vivos, y un elevado grado de deshidratación en su citoplasma. Todo esto hace que su tinción sea difícil, por ello existen técnicas especiales para la tinción de endosporas. En esta práctica de laboratorio desarrollaremos la técnica de Dörner y la de Schaeffer & Fulton.

En la técnica de Dörner se emplea carbolfucsina como colorante primario y la nigrosina, debido a su naturaleza ácida (aniónica), actúa como decolorante y también como colorante de contraste (tiñe el medio). Por ello se observa la endospora de color fucsia y el medio de color oscuro, la parte vegetativa no se tiñe.

La técnica de Schaeffer & Fulton emplea carbol fucsina en la tinción de la endospora, alcohol ácido como decolorante y verde malaquita como colorante de contraste. En la muestra se debe observar la espora teñida de color verde más oscuro a comparación de la parte vegetativa.

OBJETIVOS

• Distinguir a través de dos técnicas de tinción diferencial la presencia de endosporas bacterianas y diferenciarlas de las estructuras vegetativas normales.

• Identificar la especie de Bacillus presente en la muestra, en base a la forma y localización de su endospora.

II. MARCO TEORICO

2.1. Endospora

Algunas especies del dominio Bacteria producen en el interior de sus células estructuras llamadas endosporas, durante un proceso de esporulación. Las endosporas son células diferenciadas extraordinariamente resistentes al calor y difíciles de destruir, incluso por agentes químicos agresivos.

Figura1: Vista de endosporas a 1000 X

2.1.1. Estructura de la endospora

La estructura es muy compleja y presenta muchas capas. La capa mas externa es el exosporio. Por debajo de esta se encuentra la cubierta de la espora, que se compone de varias capas de proteínas específicas de la endospora. Por debajo de la cubierta de la espora se localiza el cortex, que no es más que una capa de peptidoglucano.

Figura 2: Estructura de las capas de la endospora bacteriana

2.1.2. Propiedades de la endospora

El nucleo de una endospora madura difiere mucha de la celula vegetativa de la cual deriva, además presenta un alto contenido de dipicolinato cálcico. El nucleo de esta estructura se presenta en un estado parcialmente deshidratado. Esta deshidratación aumenta mucho la termorresistencia de la endospora y al mismo tiempo le confiere resistencia a sustancias químicas y hace que las enzimas estén inactivas.

La endospora contiene elevados niveles de proteínas especificas denominadas pequeñas proteínas acido soluble de la espora estas proteínas se forman durante el proceso de esporulación y tienen por lo menos dos funciones. Por un lado se unen fuertemente al ADN y lo protegen de las radiaciones ultravioletas, la desecación y el calor seco. Por otro lado estas proteínas pueden servir como fuente de carbono y energía para una nueva celula.

2.2. TINCION DIFERENCIAL ACIDO-RESISTENTE

Es un método importante de la tinción diferencial, usando para colorear superficies que no se unen fácilmente a los colorantes simples y hay que teñirlas con tratamientos más fuertes.

Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos de cadena larga (ácidos micólicos) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la dificultosa tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. Las bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y las endosporas de las bacterias del género Bacillus y Clostridium, que se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) Las endosporas son capaces de resistir una amplia gama de agentes agresivos ambientales, físicos y químicos.

Se produce una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años. Algunas de las bacterias productoras de endosporas

...