Parasitologia

E:

MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

INMUNOHEMATOLOGIA.CATEDRATICA:

Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ

DIVULGACION CIENTIFICA DELA QUIMICA CLINICA

OBTENIDO DE:www.quimicaclinicauv.blogspot.com1

CONTENIDO:

1.“DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH”

2.DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

3.DETERMINACION DE RH

4.DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

5.PRUEBA DE COMPATIBILIDAD

6.PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA (TÉCNICA SALINA)

7.PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA (TÉCNICA ALBUMINA)

8.PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

9.DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

10.IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

9.DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO10.IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Practica No. 1“Determinación de grupo sanguíneo ABO y Rh”Introducción:

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de lasangrequedependen de losantígenospresentes en la superficie de losglóbulos rojosy en elsuerode lasangre.Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto alsistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rhnegativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinacionesposibles entre ambos sistemas.Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccióninmunológica que puede desembocar enmuerte.Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A ensu superficie yanticuerposcontra los antígenos B en el suero de su sangre.Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenosde tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre.Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en lasuperficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientrasque las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ningunode los dos anticuerpos.A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema acualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.Losdonantes de sangrey los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- escompatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal.Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y sedice que es un receptor universal.

Material y equipo:

•

40 tubos de ensayo de 12 x 75

•

4 pipetas Pasteur

•

1 gradilla de unicel

•

3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA

•

1 tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante

•

Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *

•

Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O

•

1 centrifuga*

Reactivos:

Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal Lafon

Lote:9662 Lote: 8764

Cad: 09NOV08 Cad: 31OCT08

Aspecto: transparente Aspecto:transparente

Color: azul Color: incolor

Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE

Lote: 9762 ALote: NDMG04305

Cad:09NOV08 Cad: 29MAR08

Aspecto: transperente Aspecto: transperente

Color: amarillo Color: incoloro

Técnica:

Método directo

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo:

1, 13, Anti-A; 1, 13, Anti-AB, etc.

El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes.3.En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada, de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría.4.Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y una gota de antisuero, según corresponda.

5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antígeno-anticuerpo (formación de un

Botón)

6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Método inverso

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antígeno conocido: A1, A2, B y O. Ejemplo:

1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes.3.Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponda y una gota de los eritrocitos con antígeno conocido.

4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antígeno-anticuerpo (formación de un

Botón).

5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Resultados:

Interpretación:

Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antígeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antígeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinación querrá decir que no corresponde el antígeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el antígeno está ausente en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B), ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). Lo mismo sucede para el sistema Rh; al presentarlo (Rh +) o no (Rh -).Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción antígeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antígeno conocido, los cuales sirven de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre inverso.

Conclusión:

Concluyo que Para realizar una transfusión sanguínea se debe tomar en cuenta la sangre del donante y la del receptor. Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre a cualquier otro grupo sanguíneo, porque sus eritrocitos carecen de antígeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor. Las personas del grupo AB pueden recibir sangre de cualquier grupo, ya que carecen de anticuerpos.

PRACTICA Nº 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

Anti- A

1

Lectina(Dolichos biflorus)

Lectina de grupo sanguíneo

INTRODUCCION:

El sistema de grupos sanguíneos ABO sigue siendo el primero a tener en cuenta en el momento de realizar una transfusión de sangre. Los antígenos A y B son productos génicos fácilmente detectables y constituyen marcadores genéticos de gran valor. Entre los individuos A, se distinguen 2 categorías: A1y A2.La diferenciación entre ambas se realiza mediante la utilización de anticuerpos monoclonales y lectinas específicas de grupo sanguíneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H).

Uso:

Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar células rojas A1 de otros subgrupos A en pruebas en tubo o en placa.

MATERIAL Y EQUIPO:

•Tubos de ensaye de 10/75 mm.

•Cronometro

•Marcador

•Centrifuga serológica

MUESTRA BIOLOGICA:

•Células rojas de donador o paciente

REACTIVO:

•Inmucor anti-A1

Lectin en gotero MARCA: INMUCOR. INCLOTE: SN2132CADUCIDAD: 2007-12-14

TECNICA:

1.Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados.

2.Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina. Mezcle completamente el contenido del tubo.

3.Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm.

4.Agite suavemente el tubo y re suspenda el botón celular. Examine las reacciones resultantes macroscópicamente. Registre resultados.

ANTI-H (LECTINA)Ulex

...