SEPARACIÓN DE PROTEINAS POR ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA.
Enviado por rubivegaaaa • 16 de Mayo de 2016 • Ensayos • 1.136 Palabras (5 Páginas) • 345 Visitas
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
DEPARTAMENTO DE BIOQUIÍMICA
LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS
SEPARACIÓN DE PROTEINAS POR ELECTROFORESIS EN GEL
DE POLIACRILAMIDA.
PROFESORA RESPONSABLE: CAROLINA ACUÑA GONZÁLEZ
GRUPO: 5QM2 SECCIÓN: 4
FECHA DE ENTREGA: MARTES 26 ABRIL, 2016.
OBJETIVOS
- Efectuar la separación de proteínas de varias muestras mediante la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida
- Determinar cuál es el tamaño óptimo de poro del gel, para la mejor separación de cada una de las muestras.
FUNDAMENTO
Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas, dado que reúnen una serie de propiedades idóneas: transparencia, elasticidad, porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos. La poliacrilamida se forma por copolimerización de dos compuestos, la acrilamida y la bis-acrilamida (N, N'-metilén-bis-acrilamida), en una reacción iniciada por la tetrametiletiléndiamina (TEMED) y el persulfato de amonio. El radical persulfato activa al TEMED, el cual a su vez activa al monómero de acrilamida para que polimerice. Las cadenas de poliacrilamida son entrecruzadas al azar por la bisacrilamida, formándose así una red de porosidad bastante uniforme, que puede ser regulada variando las condiciones de la reacción y las concentraciones de los monómeros. 1
Las proteínas presentan una carga eléctrica neta si se encuentran en un medio que tenga un pH diferente al de su punto isoeléctrico y por eso tienen la propiedad de desplazarse cuando se someten a un campo eléctrico. La velocidad de migración es proporcional a la relación entre las cargas de la proteína y su masa. Cuanto mayor carga por unidad de masa más rápida será la migración. 2
RESULTADOS
Tabla 1. Características de los electroferogramas a diferentes % T.
%T Característica | 5.5 | 7.5 | 10.0 | 12.5 | |
Longitud del gel antes de teñir, cm, (l) | 7 | 7.5 | 7.8 | 7 | |
Longitud del gel después de teñir, cm, (l) | 7.6 | 8 | 8.2 | 7.5 | |
Distancia recorrida por el colorante, cm, (l) | 5.3 | 5.5 | 5.9 | 5.9 | |
No. De bandas en: | Suero | 4 | 5 | 5 | 6 |
Leche | 4 | 8 | 5 | 4 | |
Clara | 7 | 9 | 8 | 4 |
Ejemplo cálculo de movilidad electroforética relativa (M) para suero, en 12.5%
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Tabla 2. Movilidad electroforética relativa promedio.
%T | Muestra | Valores de m de la proteína seleccionada (cm) | Valor promedio de m (cm) | Movilidad electroforética relativa (M) | Log (Mx100) | |||
5.5 | Suero | 5.8 | 5.8 | 5.8 | 5.8 | 5.82 | 1.011 | 2.004 |
Yogurt | 4.7 | 4.8 | 4.9 | 4.8 | 0.8341 | 1.9212 | ||
Clara | 3.3 | 3.4 | 3.4 | 3.36 | 0.583 | 1.76 | ||
7.5 | Suero | 5 | 5.1 | 5.2 | 5.1 | 0.8693 | 1.94 | |
Yogurt | 4.1 | 4 | 4 | 4.03 | 0.6869 | 1.836 | ||
Clara | 2.6 | 2.5 | 2.4 | 2.5 | 0.4261 | 1.63 | ||
10.0 | Suero | 4.5 | 4.6 | 4.7 | 4.7 | 4.6 | 0.741 | 1.86 |
Yogurt | 4.2 | 4.3 | 4.5 | 4.2 | 0.677 | 1.83 | ||
Clara | 3.1 | 3.2 | 3.2 | 3.16 | 0.5094 | 1.70 | ||
12.5 | Suero | 3.8 | 3.9 | 3.9 | 3.9 | 3.87 | 0.612 | 1.79 |
Yogurt | 3.5 | 3.6 | 3.5 | 3.53 | 0.558 | 1.75 | ||
Clara | 2.6 | 2.6 | 2.6 | 2.6 | 0.411 | 1.61 |
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