Separación Y Cuantificación De Proteínas Plasmáticas

SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍAS PLASMÁTICAS

OBJETIVO:

• Separar albúmina y globulinas partir de una muestra de sangre

• Determinar cuantitativamente por medio de una curva estándar la concentración de proteínas totales, albúmina y globulinas presentes en el plasma por el método de Biuret

MARCO TEÓRICO

Las proteínas son biopolímeros de aminoácidos de alto peso molecular. En las proteínas naturales se encuentran 20 aminoácidos esenciales. Las proteínas pueden ser fibrosas, como la fibroína de la seda o globulares como la albúmina. La forma depende de enlaces peptídicos entre cada par de aminoácidos, en un orden específico. Los cambios de propiedades físicas, químicas y biológicas se acompañan de modificaciones de las fuerzas de unión no covalentes que en última instancia establecen la forma o la geometría de la molécula proteínica.

Existen 4 factores que afectan la solubilidad de una proteína

- La fuerza iónica

- pH

- Temperatura

- Constante dieléctrica del solvente

La presencia de una sal sencilla puede modificar de manera importante la solubilidad. La disminuc8i’ón de la solubilidad en caso de fuerzas iónicas elevadas constituye la “precipitación salina” o “salting-out”. La solubilización salina estabiliza los grupos cargados en las proteínas, la precipitación salina representa una competición entre la proteína y la sal respecto al agua, cuando se aumenta la concentración de sal, se desplaza el agua y se transforma en agua de hidratación alrededor de los iones cargados de la sal y por lo tanto las proteínas precipitan.

La sangre se encuentra en el sistema circulatorio, y es movida de manera rítmica y unidireccional gracias a los latidos cardíacos.

Está formada por dos fases:

-Glóbulos sanguíneos: Son eritrocitos, plaquetas y leucocitos

-Plasma: Fase líquida donde encontramos agua, inmunoglobulinas, albúmina.

Las proteínas que son solubles en agua pueden dividirse en albúminas y globulinas.

- Las albúminas son muy solubles en soluciones acuosas de fuerza iónica baja pero precipitan con sal.

- Las globulinas son insolubles en agua pura pero se disuelven por efecto de fuerzas iónicas bajas en sales.

Albúmina: La albúmina es una proteína producida por el hígado. El examen de albúmina en suero mide la cantidad de esta proteína en la parte líquida y transparente de la sangre. La albúmina ayuda a transportar muchas moléculas pequeñas a través de la sangre, entre ellas bilirrubina, calcio, progesterona y medicamentos. Juega un papel importante para impedir que el líquido de la sangre se filtre hacia los tejidos. La albúmina constituye el 55% del total de las proteínas plasmáticas que representa 4g/100mL.

Globulinas: La globulina es un término genérico utilizado para describir un conjunto de sesenta proteínas, incluyendo los anticuerpos o globulinas gamma. Hay cuatro grupos básicos de globulinas conocidas como la alfa-1, alfa-2, beta y gamma. Estos se utilizan para ayudar a las proteínas de transporte a través de las lipoproteínas de la sangre y ayudar en la coagulación. También actúan como células plasmáticas que indican si existe una deficiencia de anticuerpos en el torrente sanguíneo. El hígado produce la mayor parte de las globulinas alfa y beta. Las globulinas constituyen el 38% del total de las proteínas.

Las proteínas y los péptidos, en medio alcalino, forman con el ion Cu++ quelatos solubles, de coloración característica, desde un azul intenso al violeta o rosa.

La reacción de Biuret se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu++ y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu++ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados como en el suero.

Cadena peptídica Complejo cúprico coloreado

El suero se obtiene a partir de la sangre por centrifugación después de la finalización del proceso de coagulación llevado a cabo por las

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