Tinción diferencial para bacterias ácido-alcohol resistentes y tinciones especiales

Universidad Nacional de Colombia[pic 1]

Facultad De Ciencias - Departamento de Farmacia

Microbiología General – 2015689

Informe de laboratorio

Practica: Tinción diferencial para bacterias ácido-alcohol resistentes y tinciones especiales

Objetivos

• Aplicar diferentes tipos de tinciones especializadas para estructuras de organismos acido-alcohol resistentes que no se tiñen normalmente con tinciones simples como tinción de Gram
• Identificar y caracterizar los diferentes organismos con ayuda de las tinciones de Gram, tinción de Sheaffer Foulton y tinción con tinta china.
• Relacionar conceptos teóricos aprendidos en clase con la forma en que las tinciones funcionan con las distintas estructuras celulares.

Resultados[pic 2]

Discusión de resultados[pic 3][pic 4][pic 5][pic 6][pic 7][pic 8][pic 9][pic 10][pic 11][pic 12]

Se realizó el frotis de colonias con estructuras tanto regulares como irregulares para poder hacer una relación entre la morfología microscópica y macroscópica de las bacterias. Las muestras representadas en la Ilustración 2 e Ilustración 5 se obtienen de una colonia de morfología circular regular que posee una elevación convexa con hendidura central y un diámetro entre 0.3 cm y 0.5 cm. Dicha colonia es de color blanco y se alcanza a notar ciertos filamentos alrededor de la hendidura. En el caso de la colonia correspondiente a la Ilustración 3 e Ilustración 4, presenta una forma irregular de borde igualmente irregular ondulado y con una elevación plana. Cabe destacar que el color de esta cepa es parcialmente lechoso y cuenta con un diámetro entre 0.6 cm a 1 cm.

En primer lugar, se realiza la tinción de Gram sobre los diferentes tipos de colonia para observar las diferencias morfológicas de los microorganismos, luego, para la colonia de forma regular, se observan bacterias de tipo bacilo Gram positivo en agrupación empalizada. No se logra ver estructuras como esporas, por tanto, puede que la especie sea demasiado joven (intervalos de vida entre 18 y 24 Horas) [1] o no tengan necesidad de crear estas estructuras. En este tipo de tinción no es posible identificar si los bacilos en cuestión poseen algún tipo de Glico Calix como una capsula en forma de envoltura. El tipo de microorganismo y sus características evidenciadas por la tinción junto con la forma regular de sus formas podría indicar especies similares o cercanas a la Bacillus sphaericus cuya descripción encaja en los parámetros descritos anteriormente (morfología estructural, tipo de membrana y forma de colonia) [2], sin embargo, no se puede confirmar.

Ahora bien, para la colonia de forma irregular se observan bacilos Gram positivos de morfología estreptobacilos de gran tamaño acompañado de esporas con un centro ovalado transparente. No se logra identificar otra estructura por lo que se puede proponer que esta especie de bacilos está en producción de esporas para una futura supervivencia a ambientes hostiles. Con esta tinción no se logra hacer una comparación entre estructuras (esporas) y organismos bacterianos. La forma irregular de esta colonia podría ser explicada a raíz de la morfología bacteriana en cuestión, ya que se tratan de bacilos largos que se pueden agrupar en cúmulos no necesariamente ordenados.

Usando las tinciones especiales, para el caso de Sheaffer Foulton se busca hacer el reconocimiento de endosporas. Como se observa en la Ilustración 4, hay una gran presencia de esporas provenientes de la colonia irregular. Anteriormente con la tinción de Gram fue posible colorear algunos ejemplares, sin embargo, con esta nueva tinción, se logra observar un mayor número de endosporas alrededor de los estreptobacilos confirmando así que esta es una especie que crece en colonias irregulares con una morfología celular correspondiente a una especie de estreptobacilos Gram positivos con capacidad de formar endosporas de ovulo translucido central.

La diferencia entre la efectividad con la tinción usando el verde de malaquita consiste en el uso de calor para aumentar la permeabilidad del colorante entre membranas de esta estructura, además, el uso de fucsina de Gram contrasta al teñir las células bacterianas.

Para la identificación de una envoltura sobre la bacteria es usada la tinción con tinta china por su facilidad de uso. En este caso se seleccionó las bacterias de la colonia de forma regular anteriormente descrita cuyos organismos principales son bacilos agrupados en empalizada. En la Ilustración 5 se observan figuras luminosas y un fondo oscuro con grupos parecidos a cúmulos pertenecientes a la tinta china seca. Como en la tinción de gram se observó una especie de bacilos, es coherente que en esta imagen se observen morfologías similares, sin embargo, como el proceso de frotis fue diferente no se observan las estructuras tan claras como en un frotis fijado con calor. Se observa demasiada luminosidad alrededor de los puntos que se presume tienen una capsula de polisacárido, no obstante, con la manipulación correcta de la intensidad lumínica del microscopio y el correcto ajuste del diafragma se puede identificar formaciones de bacilos rodeados por una envoltura gruesa que corresponde a la capsula. En este tipo de tinción no es posible identificar estructuras celulares como esporas que se han visto en las anteriores ilustraciones por lo que hay una alta selectividad para el uso de esta tinción.  [pic 13]

Conclusiones

El uso de las tinciones especializadas como Sheaffer Foulton permitió la identificación de endosporas de ovulo translucido central en una colonia de forma irregular junto con bacterias estreptobacilos reconocidas como Gram positivas por tinción de Gram, además, la tinción con tinta china ayudó al reconocimiento de una envoltura de polisacárido en una muestra de bacilos Gram positivos provenientes de una colonia de morfología regular uniforme.

Al igual como se reporta en la literatura, la tinción de Sheaffer Foulton colorea de un color verde las endosporas presentes gracias al uso de calor para aumentar la permeabilidad del colorante, así como la tinta china no logra permear la capsula de las bacterias, permitiendo el reconocimiento de la estructura.

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