Informe 4: Eco, urocultivo y antibiograma

INFORME 4: ECO, UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

1. Objetivos

1. Identificar y describir las diferentes etapas del proceso de examen de orina, incluyendo la recolección, conservación y transporte de la muestra

2. Realizar un cultivo de orina utilizando técnicas adecuadas de inoculación y incubación.

3. Identificar y describir las características morfológicas y bioquímicas de los microorganismos aislados en el cultivo.

4. Realizar un antibiograma para determinar la sensibilidad de los microorganismos

1. Examen macroscópico, bioquímico y microscópico de muestra de orina

1. MATERIALES:

• Muestra de orina
• Frasco estéril de boca ancha
• Tubos de ensayo
• Laminas porta y cubre objeto
• Pipetas
• Gradillas
• Tiras reactivas

[pic 1]

1. PROCEDIMIENTO

• Examen físico o macroscópico: este examen nos permite observar algunas características de la orina como por ejemplo:

• Color
• Claridad
• Olor
• Volumen

• Examen bioquímico: tiene como finalidad detectar algunas patologías que podrían aparecer en la orina.

• Agregamos la muestra de orina en tubo de ensayo una vez allí colocamos la tira reactiva en la muestra por 90 segundos aproximadamente luego retiramos el exceso y haremos la lectura por colorimetría. Valoraremos:

• Densidad
• Ph
• Proteínas
• Glucosa
• Cetonas
• Sangre
• Bilirrubinas
• Urobilinogenos
• Nitritos
• Leucocitos

• Examen microscópico: este examen nos permite observar más a fondo en nuestra muestra y así observan distintas sustancias.

• Para dicho examen obtendremos el sedimento urinario en el cual tendremos que centrifugar la orina durante 15 min a 2500 rpm.
• Seguidamente eliminaremos el exceso y colocamos la muestra en un porta objeto lo cubrimos con cubre objetos y llevamos a observar en el microscopio allí observaremos si encontramos:

• Células epiteliales
• Eritrocitos
• Leucocitos
• Cilindros
• Cristales
• Parásitos
• Hongo

1. Preparación de medios de cultivo

1. MATERIALES [pic 2][pic 3][pic 4]

1. Placas Petri
2. Medios de cultivo

1. AGAR TSA
2. AGAR BLOOD
3. AGAR MACCONKEY
4. MANITOL SALADO

1. Asa de siembra[pic 5][pic 6]
2. Cocina
3. Mechero [pic 7]
4. Agua destilada
5. Papel Kraft
6. Algodón [pic 8]
7. Pabilo
8. Balaanza
9. Marcador

1. PROCEDIMIENTO: Para preparar nuestros medios de cultivo necesitaremos tener nuestro espacio esterilizado.

1. Esterilizamos nuestras placas Petri.
2. Lavaremos nuestro matraz  
3. Agregamos agua destilada
4. Pesamos nuestro polvo de agar según lo que necesitaremos y agregamos al matraz con el agua destilada
5. Movemos para disolver
6. Llevamos a la cocina para diluirlo totalmente
7. Llevarlo a ebullición para que se disuelva en su totalidad.
8. Tapamos con algodón y cubrimos con papel Kraft y aseguramos con pabilo.
9. Colocamos en el autoclave a una temperatura de 121° por 15 minutos a una presión de 1.01  BAR
10. Distribuimos en las placas Petri. Para hacer la siembra de nuestras muestras.
11. Finalmente incubamos por 48 horas

1. Preparación del agar MÜLLER-HILTON para el antibiograma

MATERIALES NECESARIOS:

- Agar Müller-Hinton en polvo                         - Agua destilada         - Placas Petri estériles

- Autoclave o horno de esterilización                 - Pipetas estériles         - Cuchara estéril

PREPARACIÓN DEL AGAR MÜLLER-HINTON:

1. Pesaje del Agar Müller-Hinton: Pesa la cantidad necesaria de Agar Müller-Hinton en polvo según las instrucciones del fabricante. La cantidad típica es de 38-40 g/L. [pic 9]

2. Mezcla con agua destilada: Mezcla el Agar Müller-Hinton en polvo con agua destilada en un recipiente estéril. Asegúrate de que la mezcla esté homogénea.

3. Esterilización: Esteriliza la mezcla en una autoclave a 121 ° C durante 15-20 minutos o en un horno de esterilización a 180°C durante 30-40 minutos.

4. Enfriamiento: Deja enfriar la mezcla a una temperatura de aproximadamente 50-60°C. Esto es importante para evitar que el agar se solidifique demasiado rápido.         

PREPARACIÓN DE LAS PLACAS PETRI:

1. Colocación de las placas Petri: Coloca las placas Petri estériles en una superficie plana y asegúrate de que estén abiertas. [pic 10]

2. Agregación del Agar Müller-Hinton: Agrega aproximadamente 20-25 mL de la mezcla de Agar Müller-Hinton enfriada a cada placa Petri. Asegúrate de que la mezcla cubra toda la superficie de la placa.

3. Nivelación: Nivela la placa Petri para asegurarte de que el agar esté distribuido uniformemente.

4. Solidificación: Deja que el agar se solidifique a temperatura ambiente durante aproximadamente 30-40 minutos.

5. Almacenamiento: Almacena las placas Petri con Agar Müller-Hinton en un lugar fresco y seco, alejado de la luz directa.

SELECCIÓN DE DISCOS DE MEDICAMENTOS:[pic 11]

El proceso de selección de los discos de medicamentos se basa en la identificación de la bacteria y su patogenicidad, así como en la experiencia clínica y las guías de tratamiento establecidas. Esto se hace para evaluar la sensibilidad de la bacteria a diferentes medicamentos antibacterianos y para determinar el tratamiento más adecuado.

1. Bacterias Gram-positivas: Para bacterias como Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Enterococcus faecalis, se suelen utilizar discos de medicamentos como:

- Oxacilina                 - Eritromicina                 - Clindamicina                  - Vancomicina.

2. Bacterias Gram-negativas: Para bacterias como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa, se suelen utilizar discos de medicamentos como:

- Ceftriaxona                 - Ceftazidima                 - Ciprofloxacina         - Gentamicina

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