INFORME DE MICROBIOLOGIA 4

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INFORME DE LABORATORIO 4: TÉCNICAS DE SIEMBRA

INTRODUCCIÓN

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros. Existen diferentes técnicas de siembra: por suspensión de la muestra en medios líquidos; extensión de diluciones de un cultivo en superficie de medios en caja de Petri; por estría en caja de Petri y tubos con medios solidificados en forma inclinada; por piquete o picadura en tubos con medios sólidos o semisólidos. Con la aplicación de cada técnica se obtiene información de importancia para el estudio básico o aplicado de los microorganismos de interés.

En la naturaleza, los microorganismos generalmente se encuentran en poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por lo que uno de los objetivos de estudio más importantes en microbiología es aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante la técnica de estría cruzada para producir colonias aisladas en cultivos sólidos y así, obtener un cultivo puro o axénico, también conocido como cepa, que contiene un solo tipo de microorganismo con la misma composición genética.

Cuando la técnica por estría se aplica para aislar un microorganismo de interés a partir de mezclas donde se encuentra en pequeñas cantidades, generalmente se obtendrán las bacterias dominantes. En este caso, se utilizan medios selectivos o de enriquecimiento, los que contienen nutrientes especiales, antibióticos, altas concentraciones de sales y/o condiciones de pH, luz o temperatura que incrementarán la población del microorganismo de interés y se  facilitará  su  aislamiento.  Si  se  agregan a  los  medios  de  cultivo otros  componentes  como: sangre, colorantes, indicadores, es posible distinguir entre especies bacterianas por la forma en que metabolizan los sustratos y que se manifiesta por cambios en la apariencia del pH del medio de cultivo.

Estos medios se conocen como medios diferenciales y son de gran utilidad para la caracterización e identificación de especies bacterianas.

OBJETIVOS

• Conocer las diferentes técnicas de siembra y aislamiento de cultivos de bacterias en diferentes medios de cultivo.
• Comprobar la utilidad que tienen los medios de cultivos de uso general, diferenciales y selectivos.

MATERIALES:

•   Cajas Petri con agar nutritivo (AN)

•   Cajas Petri con agar eosina azul de metileno (EMB)

•   4 tubos con caldo nutritivo (CN)

•   4 tubos inclinados con AN

•   2 mecheros Fischer

•   2 asas de inoculación

•   1 piceta con agua destilada

•   1 incubadora a 30°C

•   1 refrigerador

•   2 pares de guantes de asbesto

•   Escobillones, fibra, detergente y toallas de papel

•   Papel estraza, algodón y gasa

•   2 autoclaves con base, canastilla y válvula

•   2 balanzas analíticas

PROCEDIMIENTOS

El profesor proporcionará cultivos puros (cepas) de bacterias Gram (+): Bacillus sp., Gram (-): Escherichia coli. Cada equipo de trabajo inoculará E. coli y una bacteria Gram +, en una caja de cada medio de cultivo preparado con anterioridad. Llevar a incubar a 30-35 ºC por 24 horas. Observar y describir cada placa o tubo inoculado:

1. Siembra por estría en placa Petri:

A. Dividir cada una de las cajas Petri por la parte de atrás en cuatro cuadrantes. Esterilizar el asa con calor en el mechero.

B. Dejar enfriar el asa y tomar la muestra de una colonia.

C. Inocular la muestra haciendo 4 o 5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la caja, cerrar la caja. Flamear el asa de inoculación y hacer girar la caja Petri un cuarto de vuelta.

D. Abrir nuevamente la caja y con el asa de siembra esterilizada y fría, tocar la superficie del de estrías recién hechas en un punto alejado del inicio. Hacer un segundo grupo de estrías como en el caso anterior. Realizar el mismo procedimiento en el tercer cuadrante y en el último cuadrante, sin flamear el asa de siembra hará una estría más abierta (simple).

F. Las cajas con la base hacia arriba se incuban a 35°C durante 24-48 horas. G. Observar el crecimiento de colonias en las placas de AN inoculadas.

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2. Siembra por inoculación en caldo:

A. Después de la incubación de los cultivos, seleccionar, de las cajas Petri con AN, la colonia más aislada de cada cepa.

B. Transferir con el asa, previamente esterilizada y fría, una pequeña muestra de la colonia a un tubo de CN.

D. Incubar los tubos a 35°C durante 24-48 hrs.

E. Observar y reportar la forma de crecimiento de los microorganismos en los tubos CN. (Turbidez)

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