Evolucion masiva del gen de las cadenas pesadas de Ig en niños con leucemia linfoblastica aguda de precursores B

Massive evolution of the immunoglobulin heavy chain locus in children with B precursor acute lymphoblastic leukemia

     La Leucemia Aguda Linfoblástica de Precursores B (B-ALL), se pensaba que era una enfermedad clonal resultante de la transformación maligna y expansión de una sola célula B. La población de células B puede medirse mediante el análisis de los rearreglos que pueden ocurrir en los genes  que codifican la cadena  pesada de la inmunoglobulina IgH.

   En etapas tempranas del desarrollo del linfocito B hay recombinación genética en el locus de la IgH, que da lugar a reordenamientos únicos en los segmentos VDJ, durante esta recombinación, otros nucleótidos se pueden adicionar a las uniones entre los segmentos, y desplazar a otros (V, D o J) de la secuencia germinal.

      Estos rearreglos únicos son usados como marcadores  clonotípicos en los linfocitos B.

      Usando métodos de PCR,  han demostrado que hay cambios, rearreglos de la IgH originados entre el diagnóstico y la recaída en una proporción significativa en los casos de pacientes pediátricos con B-ALL. Estos casos pueden representar la persistencia de clones ancestrales, que después de la expansión clonal, o continúan evolucionando y ajustando del clon primario, o después de la quimioterapia. Los cambios que continúan presentándose en el locus del IgH, son el resultado de estos 2 distintos mecanismos. Primero, un segmento V de la cadena pesada es cambiada por otro V alternativo, pero con el mismo segmento DJ, y esto ocurre en el ancestro clonal, que puede recombinar con múltiples segmentos V.

    Estudios previos han investigado el significado clínico de la evolución clonal de IgH en pacientes con B-ALL.  Las clonas de los pacientes que tiene recaídas, tiene rearreglos de IgH, a menudo pueden rastrearse volviendo a la población que presente menos clonas al momento del diagnóstico.

   Estos estudios destacan la necesidad de identificar todas las lonas malignas al momento del diagnóstico. A pesar de la importancia de la evolución clonal, ésta aún no se estudia a profundidad.

   Para una posterior caracterización de la evolución clonal en B-ALL, realizaron una secuenciación de IgH en las muestras de diagnóstico de 51 niños con B-ALL.  Previamente se han usado métodos de secuenciación para caracterizar la diversidad de células B en muestras individuales con alta sensibilidad. En esta propuesta cada rearreglo en la secuencia de IgH representa un clonotipo único, permitiendo la identificacion de las células que tengan ese rearreglo.

   En este estudio se realizaron métodos de determinación del clonotipo, citometría de flujo y secuenciación genética.

    Se realizó este estudio para obtener conocimientos más profundos sobre la evolución clonal en la B-ALL infantil. Se observó una evolución clonal profunda en el locus de IgH en las muestras de diagnóstico de pacientes con B-ALL. Algunas muestras no contenían ninguna alta frecuencia de rearreglos de IgH, lo cual es consistente con los estudios previos, que revelaban una falta de clonicidad en algunos pacientes. Observaron hasta 4024 evoluciones de clonotipo por paciente. Esta magnitud de evolución clonal, no había sido descrita previamente, y anticipan que esta evolución adicional de clonotipos pueden estar presentes y ser indetectables por los algoritmos actuales. La mayoría de los clonotipos evolucionados, están presentes en un baja frecuencia al diagnóstico, haciéndolos indetectables  por las investigaciones previas. Debido a que este estudio se centró en un solo locus, fueron capaces de secuenciarlo a profundidad y pudieron identificar los  eventos de evolución de muy baja frecuencia. La importancia clínica de estas evoluciones de baja frecuencia todavía no es clara, pero encontraron que la asociación  entre evolución y recaídas es significativa.

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