MICROBIOLOGIA

o MICROBIOLOGIA.

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan solo colorantes llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram.

 ¿Qué es la tinción de Gram?

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884.

 ¿Para qué se utiliza?

La tinción de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color), considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.

Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada (por tratamientos antibióticos, edad celular…).

Las bacterias gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contra colorante.

 Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana:

Pared Gram +

capa densa y uniforme de 200 a 800 A)

ácidos teicoicos

Polisacáridos

proteínas (pocas veces)

glicopéptido (50% del peso seco)

Pared Gram -

capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor)

lipopolisacáridos

lipoproteínas

Proteínas

glicopéptido (10% del peso seco)

 El mecanismo de la tinción Gram es el reseñado en el siguiente esquema:

Productos que se utilizan Reacción y coloración de las bacterias

GRAM + GRAM -

1) Cristal violeta Células color violeta Células color violeta

2) Lugol solución iodada Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta. Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta.

3) Alcohol Se deshidratan las

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