Microbiologia

UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

FACULTAD TECNOLOGICA

DPTO. DE CIENCIAS Y TECNOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

TECNOLOGO EN ALIMENTOS

PRACTICO 1

PROCEDIMIENTOS BASICOS

EN MICROBIOLOGIA

PARTE I

Ramo: Lab. de Microbiología de Alimentos

Fecha de realización: 31/03/2014

Fecha de entrega: 07/04/2014

OBJETIVOS

• Identificar materiales, equipos e instrumentos empleados en la práctica microbiológica.

• Manejar en forma apropiada materiales, equipos e instrumentos usados en microbiología.

• Esterilizar materiales de uso microbiológico.

• Preparar medios de cultivos estériles.

INTRODUCCIÓN

Con la finalidad de conocer los materiales equipos e instrumentos a utilizar en el laboratorio de microbiología, se llevó a cabo la preparación de materiales de cultivo estériles, conociendo con posterioridad el manejo apropiado de los materiales.

Estos medios de cultivos son una mezcla de diversos nutrientes que en concentraciones adecuadas permite el crecimiento de microorganismos, los que nos permitirá observar el crecimiento que tendrá cada cultivo.

Para este laboratorio se elaboraron 4 formas de cultivo, cada uno con un medio de cultivo diferente, el primero estudiado será el Agar Plate Count, medio de cultivo sólido, recomendado para el recuento de bacterias aeróbicas en aguas, aguas residuales, productos lácteos y otros alimentos. Luego, tenemos al Agar Nutritivo, medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Posteriormente, se realizó un cultivo con Nutrient Broth, este se utiliza para el cultivo de varias especies de microorganismos no exigentes. Y finalmente se ocupó Peptone Water, utilizada en la creación de diluciones de microorganismos en grandes cantidades para su conteo.

PARTE EXPERIMENTAL

1.- Identificar los gramos necesitados para preparar cada medio de cultivo. Masar los medios en balanza analítica.

2.- Disolver el medio de cultivo en polvo en una determinada cantidad de agua destilada (medida en probeta) dentro de un matraz, con la ayuda de la varilla agitadora.

3.- Si el medio de cultivo que se va a preparar es un Agar, se debe disolver con agua destilada hirviendo, para eso se utiliza el electrodoméstico microondas por unos minutos hasta que éste se coloque transparente.

4.- Dosificar en tubos (con ayuda de pipeta), matraces y frascos (con ayuda de la probeta) de acuerdo a cada medio de cultivo. Tapar cada uno de estos con sus respectivas tapas (matraz: tapón de algodón, papel kraft y cinta masking). Rotular con el nombre del medio de cultivo, nombre del preparador y fecha respectivamente.

5.- Llevar a esterilizar los medios de cultivo en la autoclave a 121°C por 15 minutos aproximadamente. Tomando las debidas precauciones retirar los materiales y guardar refrigerados.

PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS

a) Agar plate count: Se preparó dos frascos de 300ml cada uno de agar plate count. La etiqueta de este medio indicó que se tenía que utilizar 23,5 gr por 1 litro. Se calculó que para cada 300ml se necesitaba 7,05 gr. Esta cantidad se masó en una balanza analítica con ayuda del papel de muestra y la espátula. Luego el medio se depositó en cada frasco y se agregó 300ml de agua destilada medido por una probeta. Se llevó al electrodoméstico microondas para calentar cada frasco por unos minutos. Sé rotuló cada frasco. Finalmente se esterilizó ambos frascos en la autoclave por unos 15 minutos a unos 121°C.

b) Agar nutritivo: Se aplicó regla de tres para poder determinar el medio a utilizar en 1 litro como lo indicó la etiqueta del frasco de agar nutritivo, obteniendo como resultado 6,9 gr, se masó esa cantidad en la balanza analítica en papel de muestra. Posteriormente el medio se vertió en un shott, además se agregó 300ml de agua destilada, la cual fue medida por una probeta. Seguido de esto el frasco se colocó en el electrodoméstico microondas para que llegara al punto de ebullición, con sumo cuidado se retiró de este. Se dosificó en 8 tubos de ensayo (utilizando la pipeta) con 7ml del medio cada uno. Se rotuló cada tubo de ensayo. Pr último se colocó 4 tubos tendidos y 4 tubos verticales para ser llevados a la esterilización de la autoclave.

c) Nutrient Broth: Se aplicó regla de tres para determinar la cantidad de medio que se necesitaba, para eso se tomó en cuenta 9 tubos de ensayo, para que no quedara muy justo el medio. Se masó 0,36 gr de nutrient broth (pH 6,9 without NaCl). Se procedió a disolver el medio en 50ml de agua destilada en un matraz erlenmeyer con la ayuda de la varilla agitadora. Luego se dosificó 8 tubos de ensayo con 5ml utilizando la pipeta. Se rotuló cada tubo y una vez sellados estos medios se ingresaron a la autoclave para ser esterilizados por un tiempo determinado.

d) Peptone water: Se comenzó haciendo regla de tres para obtener los gramos necesarios para la realización del medio de cultivo. Se identificó en la etiqueta de peptone water que era necesario 0,1 gr por 100ml, y se debía preparar 500ml de este medio, lo que dio de resultado 0,5 gr. Se masó en la balanza analítica, con ayuda del papel de muestra y la espátula 0,5 gr de peptone water al 0,1 %. Se colocó en un matraz el medio y se agregó 500ml de agua destilada disolviéndolo con la ayuda de la varilla de agitación. Luego se dosifico en 4 matraces erlenmeyer 90ml cada uno y en 8 tubos de ensayo 9 ml cada uno. Se sellaron con tapones de algodón, papel kraft y cinta masking los matraces y los tubos con sus respectivas tapas. Finalmente se llevaron a la autoclave para pasar por un proceso de esterilización.

*Autoclave: Método de esterilización mediante calor para distintos tipos de materiales.

CONCLUSIONES

Al finalizar la práctica de laboratorio se cumplieron a cabalidad los objetivos de la experiencia, realizando los distintos tipos de cultivos, así como también conocer y manejar de manera eficiente los materiales y equipos que se utilizaran comúnmente en el laboratorio de microbiología.

Los medios de cultivo fueron preparados y colocados en el autoclave, para la esterilización de los materiales ocupados, los que en las próximas experiencias de laboratorio, serán utilizados.

BIBLIOGRAFIA

• Plate Count: http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practipra.pdf

• Agar Nutritivo: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm

• Nutrient Broth:http://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007482%2808%29%281006%29_ES.pdf

• Peptone water:

http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lic/guisar_b_r/apendiceI.pdf

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