IDENTIFICACION DE AGENTE ETIOLOGICO POR TECNICAS DE INMUNOHISTOQUIMICA

DIVISION DE BIOTECNOLOGIA

IDENTIFICACION DE AGENTE ETIOLOGICO POR TECNICAS DE INMUNOHISTOQUIMICA A PARTIR DE PULMONES CON PRESENCIA DE LESIONES DE ORIGEN INFECCIOSO

TESIS

PARA OBTENER EL TITULO DE:

INGENIERO EN BIOTECNOLOGIA

PRESENTA:

FANNY DAFNE RAMIREZ FLORES

ASESOR INDUSTRIAL: MVZ. ALBERTO ORDUÑA SUMARAN

ASESORES ACADEMICOS: DRA. FLORENCIA DEL CARMEN SALINAS PEREZ

MPA: LORENA ELIZABETH CHAVEZ GÛITRON

INSTITUCIÒN: CENTRO NACIONAL DE SANIDAD, INOCUODAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA (SENASICA)

MAYO- AGOSTO 2011

INTRODUCCIÓN

Las enfermedades en vías respiratorias del ganado bovino constituyen una gran problemática en México a pesar de la existencia de un gran número de antibacterianos para la erradicación de éstas.

Los bovinos están en total desventaja comparativamente con otras especies animales en cuanto a su capacidad respiratoria. Se han determinado una serie de diferencias que predisponen al bovino a padecer con mayor facilidad las neumonías y una mayor dificultad para corregirlas, por ejemplo; los bovinos poseen una menor capacidad de presión para el intercambio gaseoso, sus pulmones son más pequeños con relación al peso corporal, también influye un menor número de macrófagos alveolares. Debido a lo anterior se ven afectados por diversos virus como el virus de la rinotraqueítis infecciosa bovina (IBR) que se divide en: virus herpes bovino tipo 1, el cual produce problemas como vaginitis pustular, balanopostitis, conjuntivitis, abortos, enteritis, infecciones generalizadas en los recién nacidos y encefalitis. El virus de IBR tipo III (motivo de estudio en el presente trabajo) es un virus que tiene la capacidad de infectar las células epiteliales de la tráquea del bovino y de destruir la capacidad del aparato mucociliar, además de infectar a los macrófagos alveolares, reduciendo su capacidad de fagocitosis y por tanto sus mecanismos de defensa del pulmón lo que facilita la infección bacteriana. Trigo (1987). Otro virus que trataremos es el virus de parainfluenza tipo III éste es capaz de infectar las células del aparato respiratorio como el virus del IBR, además de facilitar el establecimiento bacteriano, solo que en caso de no existir infección bacteriana el animal vuelve a la normalidad en 2 ó 3 días.

Existen técnicas auxiliares en el diagnóstico histopatológico de células dañadas por algún agente causal, como es el caso de las técnicas de inmunohistoquímica (IHQ) que permiten la identificación, sobre muestras tisulares o citológicas, de determinantes antigénicos. La aplicación directa de anticuerpos policlonales o monoclonales sobre secciones tisulares permite la localización microanatómica. En las últimas décadas se han utilizado técnicas que han ido evolucionando y se han consolidado como tecnología esencial en el diagnóstico patológico de rutina. La incorporación de nuevos protocolos de recuperación antigénica y la afluencia constante de nuevos anticuerpos están ampliando notablemente el ámbito de aplicación con nuevas utilidades en diagnóstico y pronóstico. La IHQ requiere una metodología específica para su correcta utilización. El personal técnico y médico debe estar específicamente entrenado en el manejo y evaluación de los distintos anticuerpos y disponer de información apropiada acerca de su sensibilidad y especificidad, del método de evaluación de resultados y de su posible trascendencia clínica. La interpretación debe efectuarse siempre conjuntamente con el contexto clínico y los hallazgos morfológicos. Es importante conocer las posibles causas de falsos positivos y falsos negativos con los distintos anticuerpos y seguir una sistemática escrupulosa de controles negativos y positivos en cada proceso de laboratorio. La mayoría de técnicas de inmunohistoquímica pueden aplicarse a tejido fijado e incluido en parafina con buenos resultados, siempre que la fijación tisular, su procesado e inclusión se realicen correctamente. La utilización de métodos o reactivos inapropiados en el tratamiento tisular previo a la inmunohistoquímica determina pérdidas de antigenicidad que limitarán o impedirán la obtención de resultados fiables.

Actualmente siguen reportándose casos de bovinos con lesiones aparentemente causadas por el virus IBR y Parainfluenza tipo III a pesar de que pueden ser controlados con vacunas, éstos siguen representando un gran problema económico para los ganaderos de nuestro país generándose la duda de la eficiencia de las vacuna contra el virus.

Con base en lo anterior el presente trabajo pretende llegar al fondo de la problemática que representan estos virus, evaluando la existencia de IBR o Parainfluenza tipo III en casos reportados anteriormente con lesiones pulmonares por medio de técnicas de inmunohistoquímica.

I.I Objetivo general

• Iniciar la estandarización de basándose en técnica de inmunohistoquímica utilizado bloques de parafina para el diagnóstico de rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) y parainfluenza (PI) tipo III en lesiones pulmonares de bovino asociado a un complejo respiratorio.

I.I.I Objetivos particulares

• Contar con los bloques de parafina del año 2006 a la fecha y por medio de la tinción de hematosina y miosina determinar si existe lesión pulmonar.

• Identificar lesiones microscópicas de complejo respiratorio bovino

• Identificar mediante la técnica de inmunohistoquímica si la lesión observada corresponde a rinotraqueitis infecciosa bovina y/o parainfluenza tipo III.

1.2 Hipótesis.

Por medio de Inmunohistoquímica se determinará la presencia de IBR y PI de tipo III en lesiones pulmonares.

I.2.I Justificación.

Actualmente el IBR y PI III provocan grandes pérdidas económicas para los ganaderos de nuestro país.

Las técnicas de inmunohistoquímica han sido de gran ayuda para la evaluación del efecto de diversos virus sobre tejidos infectados. Con base en

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