EFECTIVIDAD DEL PROPRANOLOL EN COMPARACION CON EL RANIBIZUMAB EN LA INHIBICION DE LA NEOVASCULARIZACION DEL POLO POSTERIOR INDUCIDA EN CONEJOS

EFECTIVIDAD DEL PROPRANOLOL EN COMPARACION CON EL RANIBIZUMAB EN LA INHIBICION DE LA NEOVASCULARIZACION DEL POLO POSTERIOR INDUCIDA EN CONEJOS”.

A B S T R A C T

OBJETIVO: Evaluar el efecto del Propranolol intravitreo sobre la neovascularización de segmento posterior inducida en conejos y compararlos con los efectos del Ranibizumab

TIPO DE ESTUDIO: Experimental, longitudinal, comparativo, prospectivo

MATERIAL Y METODO: Administración de Propranolol intravitreo y Ranibizumab intravitreo a modelos experimentales de neovascularización mediante la aplicación de fotocoagulación, a quienes se les determino la expresión de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y se evaluó la mejoría clínica mediante seguimiento con fluorangiografias.

RESULTADOS: Al realizar PCR-TR se observó disminución en la expresión del gen VEGF en el grupo tratado con Lucentis en comparación con el grupo con Lasser y con el grupo tratado con Propranolol, Con diferencias estadísticamente significativas entre cada una de las medias (ANOVA F 4988.57 P< 0.05), y al aplicar Prueba de Diferencia Significativa Honesta (DSH) de Tukey Se observó que solo entre el grupo Lasser y Propranolol, no existe una diferencia significativa. DSH < 7.11. Clínicamente al evaluar los resultados de las fluorangiografias expresados en porcentajes antes y después de tratamiento en el grupo Lucentis existe disminución de la NV (X2 = 21.78 1 Gl p<0.005), En el grupo Propranolol existe disminución NV (X2 = 22.98 1 Gl p<0.05)

CONCLUSIONES: Durante el presente estudio mediante las valoraciones y seguimiento con estudios de fluorangiografia, el Ranibizumab tuvo mejor respuesta clínica en comparación con el clorhidrato de Propranolol para la reducción de la neovascularización inducida con laser. En el presente estudio se demostró que el Clorhidrato de Propranolol administrado intravitreo en esta dosis no tuvo los resultados esperados en la reducción del VEGF.

A B S T R A C T.

OBJECTIVE: Evaluate the effect of intravitreal Propranolol on the posterior segment neovascularization induced in rabbits and compared with the effects of Ranibizumab

TYPE OF STUDY: Experimental, longitudinal, comparative, prospective

MATERIALS AND METHOD: Intravitreal administration of Propranolol and Ranibizumab intravitreal neovascularization in experimental models by applying photocoagulation, who have determined the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and clinical improvement was evaluated by monitoring with fluorangiography

RESULTS: When performing RT-PCR was a reduction in VEGF gene expression in the Lucentis-treated group compared with the group with Lasser and Propranolol-treated group, with statistically significant differences between each of the means (ANOVA F P 4988.57 <0.05), and applying Honest significant Difference test (HSD) of Tukey was observed only between the group and Propranolol Lasser, there is no significant difference. DSH <7.11. Clinically to assess the results expressed as percentages fluorangiography before and after treatment in the reduction of Lucentis there NV (X2 = 21.78 1 df p <0.005), exists in the Propranolol group decreased NV (X2 = 22.98 1 df p <0.05).

CONCLUSIONS: In the present study by the assessments and follow-up studies fluorangiography, Ranibizumab had better clinical response compared with Propranolol hydrochloride for reduction of laser-induced neovascularization. In the present study showed that intravitreal administered Propranolol Hydrochloride in this dose did not have the expected results in the reduction of VEGF

INTRODUCCION.

La neovascularización (NV) es la formación de nuevas estructuras vasculares en áreas que fueron previamente avasculares1,2.

El Clorhidrato de Propranolol (ClPr) es un agente bloqueante β-adrenérgico no selectivo, utilizado en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares. existen estudios en donde el uso de propanolol vía sistémica inhibe crecimiento y causa regresión de hemangiomas laríngeos y orbitarios solitarios, sin ningún efecto adverso importante4,5 Así mismo se han utilizado beta bloqueadores vía tópica como alternativa de tratamiento en otras patologías vasculares como los hemangiomas capilares en lugar de corticoesteroides, demostrando ser seguro y eficaz para el tratamiento de los mismos6

Existen evidencias de que el sistema adrenérgico está involucrado en la regulación de la hipoxia inducida por neovascularización y producción de Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF)17. En corazón embrionario la hipoxia causa sobrestimulación catecolaminergica , que a su vez altera la señalización de las vías de los beta adrenérgicos, además de que la norepinefrina estimula la producción de VEGF en células endoteliales en venas umbilicales humanas21

A partir del 2005 estudios clínicos establecieron la efectividad de Ranibizumab (Lucentis, Genentech), para el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad variedad húmeda, la principal causa de ceguera legal en los Estados Unidos15, La FDA aprobó su utilización a partir de junio del 2006, para la mejora y mantenimiento de la agudeza visual, así como para reducción de las enfermedades vasculares, fuga y edema de la retina16

En el presente estudio se evaluó el efecto del Propranolol intravitreo sobre la neovascularización de segmento posterior inducida en conejos y se comparo con los efectos del Ranibizumab, mediante la evolución clínica por fluorangiografias y determinación de la expresión del VEGF.

MATERIAL Y METODOS

Ranibizumab en solución inyectable (nombre comercial Lucentis de laboratorios Novartis), Clorhidrato de D-L propranolol marca Sigma con peso molecular 295.8 libre se preservantes, Solución salina balanceada, Bascula analítica marca Sartorius Modelo TE 64, Micropipetas marca Gilson de volumen variable, Xilazina (Procin, PISA Laboratorios) presentación de 20mg/ml, Ketamina (Anesket, Cheminova Laboratorios) presentación de 1gr/10ml, Tetracaína solución oftálmica (Ponti Laboratorios Sofia), Tropicamida Fenilefrina colirio oftálmico (T-P Laboratorios Sofía), Tobramicina Dexametasona coliro oftálmico(Trazidex Laboratorios Sofía), 24 Tubos de Eppendorf de 1500 microlitros. Trizol marca Invitrogen, Iniciadores (primers) para amplificar el gen VEGF de conejo, Gel del agarosa (Sigma), GADPh (Gliceraldehido-3 fosfato deshidrogenasa), Bromuro de Etidio, Taq polimerasa recombinante (Invitrogen), Espectrofotómetro (Genequant Pro, Amersham), Termociclador (Perkin Elmer Gene Amp. PCR System 9700), Transiluminador de luz UV (LKB 20011 Macrovue), Cámara de electroforesis horizontal modelo Horizon 58 (Gibco BRL Life Technologies), Sistema de visualización digital Ret cam 3 Laser portátil diodo marca Iridex, Lupa de 28 Dp

Se incluyeron 24 ojos de 12 conejos machos de acuerdo con la declaración para el uso de animales en investigación oftalmológica y visual de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (siglas en ingles ARVO), con un peso aproximado de 2.5–3kg , Se conformaron cuatro grupos con los doce conejos: Grupo 1. Constituido por 6 ojos izquierdos de 6 conejos (numerados del 1 al 6), a los cuales se les inducirá NV, y se aplica tratamiento con inyección de Ranibizumab intravitreo. Grupo 2. Constituido por 6 ojos derechos de 6 conejos (numerados de 4 al 9), a los cuales se les inducirá NV. Y se aplica tratamiento con inyección de Clorhidrato de Propanolol intravitreo. Grupo 3. Constituido por 6 ojos; 3 ojos izquierdos de los 3 conejos (numerados del 7 al 9), 3 ojos derechos de los 3 conejos (numerados del 1 al 3) a los cuales se les inducirá NV, y no se les aplicara el tratamiento. Grupo 4. Constituido por 6 ojos de 3 conejos (numerados del 10 al 12), los cuales son ojos sanos y no se les realizara ningún procedimiento.

INDUCCIÓN DE ANESTESIA GENERAL

Para la Inducción de la Anestesia General se utilizo Xilazina (Procin, PISA Laboratorios) a dosis de 0.5 ml/Kg de peso vía intramuscular (IM), de la presentación de 20mg/ml, y Ketamina (Anesket, Cheminova Laboratorios) a dosis de 0.25 ml/Kg de peso vía IM, de la presentación de 1gr/10ml. así mismo se aplico una gota de tetracaína tópica al 0.5% en el ojo 1 minuto antes de la aplicación de la fotocoagulación, todo lo anterior se realizo previo ayuno de 8 hrs antes de la anestesia, y bajo monitoreo por parte de un veterinario

INDUCCIÓN DE LA NEOVASCULARIZACIÓN

La inducción de la NV se llevo a cabo en base a una modificación del modelo experimental de Viridi and Hayreh; Bajo anestesia general se procedió a realizar dilatación pupilar mediante la instilación tópica de 3 dosis de Tropicamida Fenilefrina colirio oftálmico cada 15 minutos, hasta lograr midriasis total a todos los animales en estudio. Por oftalmoscopia indirecta con lupa de 28 dioptrías se realizo fotocoagulación de las 4 venas de la retina, generando oclusión de dichos vasos, utilizando 5 a 7 disparos con laser de diodo con una potencia de 150 a 200 mW, con una tamaño de 500µm por 0.3 a 0.5 segundos cerca de la papila, directamente sobre los vasos sanguíneos, y posterior al procedimiento se aplico antibiótico en colirio oftálmico.

REALIZACIÓN DE FLUORANGIOGRAFIAS.

Bajo anestesia general se realizo angiografía fluoresceína con el sistema de visualización digital Ret cam 3 a los 21 días posterior a la aplicación de la fotocoagulación, para establecer el grado de neovascularización

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