DEPARTAMENTO DE ENSEÑANZA, INVESTIGACION Y SERVICIO EN ZOOTECNIA

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DEPARTAMENTO DE ENSEÑANZA, INVESTIGACION Y SERVICIO EN ZOOTECNIA

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Profesor:

Biol.Otilio Aguilar Romero

Asignatura:

Biología celular

“Demostración del aparato de GOLGI empleando la técnica de DAFANO en cortes de epidídimo de conejo)”

Alumno:

Sánchez Hernández José Margarito

Salas Fernández Rufino

Hernández Ponce Nicolás Aldair

Ortega Vázquez Abdías Antonio

Cruz ramos Iván

5°  “C”

Chapingo, Texcoco, México; septiembre del 2015.

INTRODUCCION

La técnica de Golgi es un sencillo procedimiento histológico que revela la morfología neuronal completa en tres dimensiones. Este método se fundamenta en la formación de depósitos opacos intracelulares de cromato argéntico, producto de la reacción entre el bicromato de potasio y el nitrato de plata (reacción negra). Camillo Golgi, su descubridor, y Santiago Ramón y Cajal, su principal exponente, recibieron el premio nobel de Medicina y Fisiología en 1906 por su contribución al conocimiento de la estructura del sistema nervioso. Gran parte de sus logros se obtuvieron a través de la aplicación del método de impregnación argéntica. Sin embargo, Golgi y Cajal tenían interpretaciones diferentes sobre la estructura del tejido nervioso. Golgi era defensor de la teoría reticular, la cual proponía que el sistema nervioso estaba conformado por una red de células fusionadas a través de los axones a manera de un sincitio. Por el contrario, la doctrina neuronal, defendida por Cajal, sostenía que las neuronas eran células independientes. También se debe a Golgi y su reaccione ñera el descubrimiento del organelo celular conocido como ‘aparato de Golgi'. La microscopía electrónica confirmó los postulados de la doctrina neuronal, así como la existencia del complejo de Golgi, y contribuyó al resurgimiento de la técnica de impregnación argéntica. Aunque existen métodos modernos de tinción intracelular que revelan imágenes excelentes de la morfología neuronal, la técnica de Golgi se mantiene vigente por ser un método más práctico y menos costoso para el estudio de la morfología normal y patológica de las neuronas.

Objetivos

Aplicar la técnica histoquímica de Dafano, en la demostración del complejo de Golgi en el epidídimo de conejo, para identificará su estructura reticular de color negro en la región apical de las células y concluirá su importancia en la síntesis de las glicoproteínas y de los glicolípidos, su participación en la síntesis de algunas hormonas como la tiroxina y la insulina en el organismo animal.

Materiales y métodos

•  Obtención del tejido y sumergirlo en fijador de dafano con nitrato de cobalto 1% más formol 10% por tres días.
• Lavar en agua destilada por 2 horas
• Sumergir las piezas en nitrato de plata 1.5% en 24 horas en la obscuridad
• Lavar en agua destilada por 2 horas
• Reducir en reductor de caja en 24 horas con hidroxina 2g mas formol neutro 10ml más agua destilada 10ml mas sulfito de sodio 0.5 g
• Lavar en agua destilada 24 horas
• Procesar con técnica histológica, cortar y desparafinar
• Colocar los cortes en cloruro de oro durante 5s
• Fijar rápidamente en hiposulfito de sodio por 45s
• Lavar en agua destilada por 2 min
• Coloración con safranina por 2 min
• Coloración con verde luz por 2 min
• Lavar escurriendo 3 veces en alcohol absoluto
• Deshidratar con alcohol absoluto xilol 3 cambios por 1 min cada uno y xilol 3 cambios por 1 min cada uno
• Montar en resina sintética

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Resultados

• Precipitados negros indican Golgi
• Color rojo indican los núcleos
• Color verde indican el citoplasma

Se eligió el epidídimo de conejo debido a que es más fácil observar el aparato de Golgi, los espermatozoides deben madurar en el epidídimo, y lo que hace el aparato de Golgi es proporcionar nutrimentos a los espermatozoides.

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