Inmunologia Ficoll

1. Indique el fundamento del aislamiento de linfocitos y neutrófilos humanos con ficoll–hypaque.

La técnica de Ficoll hypaque es una tecnica de centrifugación por gradiente de densidad para separar Células Mononucleares de Sangre Periférica (CMSP) de otras células de la sangre. Durante la centrifugación se van formando varias capas, el sedimento que está formado principalmente por granulocitos y eritrocitos ha migrado a través de la gradiente de densidad que es mayor al del ficoll hypaque, encima estaría otra capa que sería el ficoll hypaque que es menos denso, y encima estaría otra capa fina opalescente que serían las CMSP, finalmente sobre esa capa estaría las plaquetas y el plasma que con futuros lavados se estarían removiendo para tratar de obtener solo los linfocitos.

2. ¿Qué características físicas de las células de la sangre permiten la distribución de las células de la sangre en distintos capas?

El eritrocito tiene un diámetro de 7-8 m, espesor máximo de 2 m, y sobre todo la densidad de los eritrocitos: 1.093-1.096, la densidad del plasma: 1.025-1.029 y la densidad de las plaquetas: 1.040. Que son las densidades las que nos ayudan en el momento de la centrifugación ya que migran según la suya y por eso nos permite separarlas en distintas capas.

3. ¿Qué es una gradiente de densidad?

Gradiente de concentración es la diferencia de concentración de soluto que existe entre dos soluciones o medios. Un ejemplo: tienes en un recipiente agua a la cual le agregas sal pero no agitas; en el momento en que agregas la sal, la mayor concentración de sal estará en el fondo del recipiente, mientras que en la parte superior la concentración será mínima. Esta diferencia es el gradiente.

4. indique los tipos de linfocitos que se encuentran en la sangre

Los dos tipos principales de linfocitos son linfocitos B y linfocitos T, o células B y células T. Ambos se originan a partir de células madre en la médula ósea y son inicialmente similares en apariencia. Algunos linfocitos migran al timo, donde maduran las células T, mientras que otros permanecen en la médula ósea, donde se desarrollan en las células B. La mayoría de los linfocitos son de corta duración, con una vida media de una semana a varios meses, pero algunos viven desde hace años, ofreciendo una larga duración. Estas células representan una más rápida y enérgica respuesta a un determinado encuentro con los antígenos.

A través de moléculas receptoras en sus superficies, los linfocitos son capaces de unir antígenos (sustancias extrañas o microorganismos que el huésped reconoce como "no propias") y ayudar a eliminarlas del cuerpo. Cada linfocito tiene receptores que se unen a un antígeno específico. La capacidad para responder a virtualmente cualquier antígeno proviene de la enorme variedad de poblaciones de linfocitos que contiene el cuerpo, cada uno de ellos con un receptor que es capaz de reconocer un antígeno único. Una vez estimulados por la unión a un antígeno extraño, tal como un componente de una bacteria o un virus, un linfocito se multiplica en un clon de células idénticas. Algunas de las células B clonadas diferenciadas en células plasmáticas que producen moléculas de anticuerpo.

5. ¿Qué es una centrifugación isopícnica?

La centrifugación isopícnica separa les partículas en un gradiente de densidades en función de la densidad de las mismas. Las partículas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde la densidad de éstas i la del gradiente son idénticas (de aquí el nombre de ‘isopícnico’). En este caso, es condición fundamental que la densidad máxima del gradiente final ha de exceder siempre a la densidad de las partículas. Por este motivo la sedimentación final no se produce si se controlan las condiciones de centrifugación, ya que las partículas flotan sobre un "colchón" de material que posee una densidad superior a la de éstas. Esta técnica se utiliza, por ejemplo, para separar partículas similares en tamaño pero de diferente densidad. En este sentido, la centrifugación isopícnica es un método adecuado para separar ácidos nucleicos o diferentes orgánulos celulares.

6. Indique que otros medios de densidad se puede utilizar para la separacion de linfocitos?

- Fluorobeads® T y Fluorobeads® B

Utilización de pequeños beads recubiertos

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