MICROBIOLOGÍA Y TOXICOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

[pic 1][pic 2]UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

TEMÁTICA: MICROBIOLOGÍA Y TOXICOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

Docente

Ing. Eva Orizano Ponce

Jefa de prácticas

Ing. Cristina Malpartida Ortega

ANTIBIOGRAMA DE CIPROFLOXACINA EN BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS

PRÁCTICA Nº 02

Torres Huapalla, Carlos Edgardo; Daza Lorenzo, Camila Yoram; Mancilla Paucar, Gressy Keylin

1. RESUMEN.

La presente investigación de aplicación del antibiograma, se realizó para la determinación de susceptibilidad de las bacterias Grampositivas y Gramnegativas como Staphylococcus Aureus y Escherichia Coli respectivamente, por medio de la prueba de Kirby Bauer frente a la actividad antibiótica de Ciprofloxacino, que se usa como alternativa veterinaria, siguiendo la metodología indicada, la preparación del medio de cultivo con agar  PCA  y Baird Parker, dio paso a la siembra de la muestra y la sumersión de los discos en un tiempo determinado de 5 minutos en el antibiótico, continuo de la dispersión de los discos en las placas según su medio de cultivo indicado S. Aureus en Baird Parker y E. Coli en PCA  ejerciendo una ligera presión sobre estas para adherirse, se dejó incubando un tiempo de 24 horas, posteriormente se evaluó cada placa y se midió el diámetro en milímetros de la zona de inhibición, se dio lectura interpretada de los resultados obtenidos el cual reveló S. Aureus frente al Ciprofloxacino, el promedio de inhibición por disco entre las dos placas fue de 47mm, que según las normativas del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio, se registra en la categoría de “sensible” y en el caso de E. Coli, el promedio del diámetro fue de 41mm, la cual definió que la categoría de inhibición es “sensible”. Concluyendo que el Ciprofloxacino actúa interfiriendo en los procesos de síntesis y reparación de los genes de dichas bacterias dando lugar a su muerte.

1. INTRODUCCIÓN.

La patogenicidad bacteriana y su resistencia frente a los antibióticos, es un problema general de salud, lo cual hoy en día sigue siendo investigado en diferentes laboratorios microbiológicos mediante pruebas que determinan la susceptibilidad, ya sea de resistencia o sensibilidad de una bacteria frente a un grupo de antibióticos, como es el antibiograma. El antibiograma es una herramienta en la optimización del uso de antimicrobianos, aplicado desde 1960; y posteriormente con la interpretación de lectura por difusión con discos propuesto por Kirby y Bauer en 1966  (Hernández, 2013; Mederos Hernández et al., 2018; Navarro Acevedo et al., 2017).

Se sabe que la interpretación de la lectura del antibiograma es en dos grupos de bacterias, tanto los cocos Grampositivos y los bacilos Gramnegativos, en este informe se presenta como inóculos a aplicar al antibiograma, Staphylococcus aureus y Escherichia coli respectivamente, hablando específicamente del S. Aureus, es un coco positivo que se agrupa en racimos de coagulasa, catalasa y β hemolítico, esto genera infecciones en la piel y tejidos blandos, encontrándose en estos mismos y es conocida por ser la principal bacteria que genera infecciones dentro de los hospitales; en el caso de los animales, se encuentra en la mucosa y piel, como un hospitalario, pero en menor cantidad que en la piel de los humanos, este produce toxinas como la hemolisina, exfoliativas y enterotoxinas (Cisterna Cáncer & Madariaga Torres, 2018; Pasachova Garzón et al., 2019; Ríos M et al., 2015).

Por otro lado, la E. Coli, es un tipo de bacteria que produce toxinas, principalmente la toxina Shiga, este se encuentra en los intestinos de los humanos y distintos mamíferos, la mayoría de las cepas son inofensivas y hasta beneficiosas, pero algunas provocan intoxicación estomacal hasta por una semana, también está relacionado con enfermedades como el síndrome urémico hemolítico y trastornos de coagulación, la forma de contaminarse por la E. Coli principalmente es por vía oral, es decir, por alimentos ya contaminados, como las carnes crudas o pre cocidas y hortalizas contaminadas con sustancias fecales, otra forma de contaminarse es el contacto directo con animales portadores, ya que no existen estudios que demuestren que la E. Coli provoquen enfermedades en los animales, los bovinos y rumiantes son los principales animales portadores de esta bacteria (OMS, 2018; Zotta et al., 2015).

El antibiótico escogido para aplicar al antibiograma fue Ciprofloxacino, este se encuentra en el grupo de las quinolonas de segunda generación (fluoroquinolonas), se define como un agente sintético antibacteriano, su eficacia es más notoria en bacterias Gramnegativos que Grampositivos, el cual dispone de actividad moderada, su aplicación es usada ampliamente por la medicina veterinaria, especialmente en perros y gatos, contrario a la enrofloxacina que usa más en animales productores, esto debido al riesgo de la presencia de residuos en los alimentos y por ende afectar la salud poblacional. Al igual que los humanos se administra para tratar infecciones de vías respiratorias, urinario, de hueso, tejidos blandos, piel, articulaciones oculares y gastrointestinales. El modo de acción del ciprofloxacino es mediante la inhibición de la replicación del ADN bacteriano, es decir que inhibe dos enzimas (ADN girasa y topoisomerasa IV), lo que posteriormente llevará a su destrucción, al igual que los demás antibióticos, no influye en infecciones virales (Espada, 2019; Magnoli et al., 2006; Moya, 2021; Suárez Olivares & Vera Vidal, 2011). Por lo ya descrito, el presente informe de antibiograma revelará la reacción de los inóculos frente al ciprofloxacino y así mismo la categoría de sensibilidad donde se encuentra este antibiótico.

1. OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL

• Analizar y comprender la susceptibilidad patológica de los inóculos Staphylococcus aureus y Escherichia coli frente a la actividad antibiótica de ciprofloxacino.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Describir la relación de los inóculos (S. Aureus y E. Coli.) con la patogenicidad en animales y cómo reacciona frente al ciprofloxacino.
• Determinar la categoría de sensibilidad del antibiótico de los inóculos frente S. Aureus y E. Coli.

1. MATERIALES Y MÉTODO.

El estudio de antibiograma por el método de Kirby Bauer se llevó a cabo en el laboratorio de microbiología de la carrera profesional de Ingeniería Agroindustrial de la Universidad Nacional Hermilio Valdizán (UNHEVAL) de Huánuco utilizando como inhibidor al antibiótico Ciprofloxacino.

Materiales:

• Mechero bunsen
• Pipetas bacteriológicas (5 mL, 1 mL)
• Placas de Petri
• Matraz Erlenmeyer
• Pinza de disección
• Espátula de Drigalsky
• Pera de goma
• Discos de papel filtro
• Regla

Medio de cultivo y soluciones

• Plate Count Agar
• Agar Baird Parker
• Alcohol de 70%
• Solución salina 0,9 %
• Agua estéril

Reactivos y muestras

• Antibiótico Ciprofloxacino.
• Escherichia coli
• Staphylococcus aureus

Metodología:

Preparación del medio de cultivo

La investigación fue desarrollada mediante el método de Difusión de Kirby Bauer (Córdova & Loayza, 2014). Con el mechero prendido, se usó una pipeta de 5 mL para poder retirar solución salina en dos tubos de ensayo con 5 ml cada uno y se colocó a esterilizar, estos tubos se usaron como medio de cultivo para los inóculos (S. Aureus y E. Coli respectivamente), donde se sembró 3 colonias por tubo, posteriormente se dejó en la incubadora por un tiempo de 24 horas a una temperatura de 37 º C.

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