Microbiologia

INTRODUCCION

La utilización de los medios de cultivo para la propagación pura de microrganismos patógenos y benéficos se convirtió en un elemento de vital importancia desde su descubrimiento por Robert Koch quien Se hizo famoso por descubrir el bacilo de la tuberculosis así como también el bacilo del cólera (por el desarrollo de los postulados de Koch. Recibió el Premio Nobel de Medicina en 1905. Es considerado el fundador de la bacteriología.), hoy en día se conocen mas de 10000 medios de cultivos diferentes, en este informe se tratara de un medio de cultivo llamado Triple Sugar Iron Agar, remontándonos un poco en la historia Russell fue el primero que demostró que la utilización de dos azúcares (Glucosa y lactosa) permitía diferenciar los bacilos Gram-negativos de origen intestinal. Otros autores introdujeron el tercer azúcar, la sacarosa, que permitió detectar aquellos Coliformes que degradan lentamente la lactosa y que muchos de ellos atacan rápidamente la sacarosa. Sulkin y Willett (1940) describieron un medio con tres Azúcares y Hierro (II) Sulfato que salvo algunas modificaciones es el actual Agar Hierro y Triple Azúcar, con especial valor cuando se utiliza combinado con medios selectivos para Entero bacteriáceas

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que enconcentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microrganismos. Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o lasílicagel

FUNDAMENTO

El medio Hierro y Triple Azúcar permite diferenciar bacilos entéricos Gram-negativos basándose en su diferente capacidad de fermentación a los tres azúcares (glucosa, sacarosa y lactosa) y producción de sulfhídrico. La degradación del azúcar da lugar a la formación de ácido que se detecta por un cambio de color del rojo de fenol que pasa de anaranjado a amarillo, mientras que si el medio sufre una alcalinización pasa de anaranjado a rojo/púrpura. Los microrganismos que sólo fermentan la glucosa, como Salmonella y Shigella, (que se encuentra en una concentración 10 veces inferior a los otros azúcares), si bien producen el viraje al amarillo, éste sólo se mantiene en la columna vertical (base del tubo) mientras que la superficie inclinada restablece el color rojo por oxidación del ácido. El color amarillo obtenido en la acidificación del medio producida por la fermentación de la sacarosa o de la lactosa es persistente. Los cultivos que contienen microrganismos capaces de formar Hierro (II) Sulfuro presentan el característico precipitado negro. La producción de gas se observa por la formación de burbujas e incluso por la rotura del propio gel.

PROCEDIMIENTO

Procedimiento

En la práctica de laboratorio se preparo un medio de cultivo con “TRIPLE SUGAR IRON AGAR”, para esto determinamos la cantidad de “TRIPLE SUGAR IRON AGAR” necesaria para disolverla en 100ml de agua destilada, para ello se realizo su respectivo caculo

cantidad de sustancia X=(100ml*65g )/1000ml=6.5g de T.S.I

Estos cálculos se los obtiene a partir de la información encontrada en la etiqueta del la sustancia utilizada; posteriormente se procedió a disolver los 6,5g de “TRIPLE SUGAR IRON AGAR” en un erlemeyer, el cual tomo una coloración roja, (ver anexo 1). El erlemeyer se llevo a calentamiento hasta que comenzó a bullir, sellando el erlemeyer con papel aluminio para evitar la contaminación, también se midió el pH con papel indicador dando un pH entre 8 y 9. Luego se distribuyo en 12 tubos de ensayo y se llevo al autoclave durante 15 min a una temperatura de 121 0C y 15 lb de presión esto con el fin de esterilizar el medio de cultivo. Pasados los 15 min retiramos los tubos del autoclave y procedimos a marcarlos, y los colocamos sobre una base de forma inclinados y esperamos 10min para que el cultivo preparado se solidificara, y posteriormente lo llevamos a un sistema refrigerado.

RESULTADOS

MEDIO DE CULTIVO: TRIPLE SUGAR IRON AGAR

CANTIDAD PREPARADA: 100 ml

CANTIDAD PESADA: 6.5 g

CÁLCULOS: 1000ml=65g/100ml X= 6.5g de TSIA

ASPECTO DEL MEDIO DE CULTIVO: El TSIA presenta un color beis o crema su contextura en polvo y con un olor a café tostado

ESTADO FÍSICO: Sólido _X_ Líquido______ Semisólido________

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

• Según la naturaleza de los ingredientes:

Natural_______ complejo_______ Sintético _x_

• Según el propósito de uso

Enriquecimiento____________ Selectivo __x__ Diferencial _x_ Otro_____________________________

DISTRIBUCIÓN: Tubos de ensayo

CONDICIONES DE ESTERILIZACIÓN: 121 oC durante 15 minutos y a 15 lb de presión

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO: Refrigeracion

CUESTIONARIO

1. Cuál fue el aporte de los medios de cultivos en el establecimiento de la microbiología como ciencia.

El medio de cultivo es una solución (solida, semisólida, solida) que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de virus, microrganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Gracias a este descubrimiento hecho por Robert Koch se facilitó el estudio de las microrganismos ya que se pueden obtener cultivos puros de bacterias, lo cual permite aislar y describir varias especies nuevas de bacterias, la microbiología se a encamina do al estudio delos microrganismos patógenos aportando a la ciencia médica muchas soluciones a las enfermedades

2. Qué ventajas ofrecen los medios sólidos para el cultivo de microrganismos?

3. ¿Qué es el solidificante de un medio?

Se añaden para preparar medios de cultivo sólidos y semisólidos. El agar-agar es el agente solidificante mas común. El agar-agar es un polisacárido de galactosa y galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina. El agar-agar es el agente solidificante más utilizado.

...