Microbiologia de Prescott.

I T E M

PONDER

ACIÓN

CALIFICACIÓN

  Formato

0.5

Ortografía

1

 Introducción

2

Materiales y métodos

1

Resultados

3

Conclusiones y recomendaciones

1

Cuestionario

1

Bibliografía

0.5

T O T A L

10

[pic 1] 

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERÍA E INDUSTRIAS

INFORME DE PRÁCTICAS  

DE LABORATORIOS Y TALLERES.

ASIGNATURA:

 Laboratorio de Microbiologia

Grupo Nº 2-M

Mesa Nº 4

CARRERA:   (En Lab)

 Ingeniería Ambiental

Integrantes [pic 2]

Beltran José

Gaón Tamya[pic 3][pic 4]

Guerrón Nelson

Proaño David[pic 5][pic 6]

NIVEL Y PARALELO (En Lab) :

2-M

Fecha realización :

2016/18/04

Fecha presentación informe:

2016/25/04

Práctica Nº:

1-2

TÍTULO DE LA PRÁCTICA  

MICROSCOPÍA: OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

1. INTRODUCCIÓN 

El microscopio es una herramienta de gran utilidad para la identificación y observación de los microorganismos debido a que son demasiado pequeños y no pueden observarse a simple vista y por este motivo solamente pueden ser observados mediante el microscopio.

Aunque los microorganismos vivos se pueden examinar con un microscopio óptico, a menudo hay que fijarlos y teñirlos para aumentar la resolución, acentuar las características morfológicas y conservarlos en su estudio en el futuro (Prescott 2002).

La fijación es el procedimiento por el cual se permite preservar las estructuras celulares y se la puede realizar por diferentes tratamientos; uno de los cuales es la fijación por calor, la cual es la más utilizada y consiste en pasar el porta objetos con la muestra bacteriana extendida a través de una llama de un mechero. Este tipo de fijación preserva la morfología externa de los microorganismos pero no las estructuras internas.

Para la visualización de estos microorganismos utilizamos una técnica llamada Tinción que se utiliza para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Las tinciones ofrecen una información adicional a la simple observación de la morfología, ya que ponen de manifiesto características de la pared celular o la existencia de estructuras especiales, como las esporas bacterianas.

 Aquí encontramos la Tinción de Gram¸las cuales se clasifican en dos grupos las Gram Positivas y las Gram Negativas. Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confi ere propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales.

2. OBJETIVOS

El objetivo del presente trabajo fue conocer los aspectos básicos sobre el uso y manejo del microscopio para la observación de microorganismos, además aprender las diversas técnicas de tinción de muestras para la correcta observación de estructuras.    

3. MATERIALES Y MÉTODOS

 Bioseguridad en el laboratorio de microbiología

Se explicó los niveles de bioseguridad que hay según el tipo de laboratorio de microbiología y se expuso como prevenir accidentes en el área de trabajo, también se dio a conocer maneras de que los materiales se mantengan estériles antes y después de su uso, pero sobre todo se dio a conocer que es necesario estar informados sobre el posible riesgo que se encuentra asociado con el manejo del laboratorio de microbiología.

Microscopia: observación de microorganismos

Se procedió a limpiar el área de trabajo (mesa) con alcohol potable y papel absorbente, como manera de seguridad y de mantener una zona esterilizada se encendió el mechero de Bunsen, con la ayuda de una aza se tomó una muestra de una colonia del microorganismo de Escherichia Coli, previamente en el portaobjetos se colocó una pequeña gota de agua destilada para proceder a esparcir la muestra, se acercó el portaobjetos al mechero para que la muestra se seque haciendo movimientos leves. Una vez que la muestra se secó se procedió a colocarle Cristal Violeta y se dejó reposar durante un minuto, una vez transcurrido el tiempo establecido se lavó con agua destilada y se le coloco una gota de lugol a la muestra para fijarla, nuevamente se lavó con el agua destilada, y se procedió a poner alcohol cetona para que degrade la coloración de las partes no tinturadas, con la ayuda de un gotero se puso algunas gotas de Safranina y se dejó reposar durante 20 segundos, se acercó  la muestra al mechero para que se seque, luego se ubicó en el microscopio y se fue enfocando desde el lente de menor aumento hasta el de 100X pero antes de observar se le puso una gota de aceite de inmersión a la muestra

4. RESULTADOS      

Observación de la colonia de Eschechiria coli

Al tomar la colonia de Escherichia coli y colocarla en el microscopio, luego de previamente haber preparado el microorganismo para su análisis, se observó al organismo con una tonalidad rojiza-rosada (Figura 1), la cual además tenía una estructura compleja llena de muchos componetes y además se pudo observar el núcleo no definido del  E. coli, con lo que se concluyó que se trataba de un organismo protista. Se realizó un análisis y se procedió a sacar las características más importantes de la muestra. (Tabla 1).

Tabla.1 Caracteristicas del microorganismo

[pic 7]

Figura 1. Escherichia coli.

[pic 8] 

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERÍA E INDUSTRIAS

INFORME DE PRÁCTICAS  

DE LABORATORIOS Y TALLERES.

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES  

5.1. CONCLUSIONES

Una vez realizada la observación y el análisis de la colonia de Escherichia coli en el microscopio óptico, se utilizó para esto la tinción de Gram, se concluyó que el microorganismo observado tiene una estructura muy compleja y que es un organismo procariota ya que no tenia su núcleo celular diferenciado mediante una membrana.

5.2. RECOMENDACIONES:

Se recomienda utilizar diferentes microorganismos para una mejor comprensión de estos organismos procariotas. 

6.  CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN:

CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN N#1  LA BIOSEGURIDAD

1. ¿Qué es la bioseguridad, de cuantos niveles consta. Enumere las características posee cada uno de estos niveles?

Bioseguridad es el conjunto de normas o actitudes que tienen como objetivo prevenir los accidentes en el área de trabajo, es decir, a disminuir el potencial riesgo ocupacional.

Durante el trabajo diario en la sección de microbiología, se dan situaciones de potenciales riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos utilizados. Las Normas de Bioseguridad pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material peligroso

EXISTEN CUATRO NIVELES DE BIOSEGURIDAD

• Nivel de Bioseguridad 1

• El acceso al laboratorio no es restringido
• El trabajo se realiza por lo regular en mesas estándar de laboratorio.

• Nivel de Bioseguridad 2

• Se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente.

• El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes patógenos
• El acceso al laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo.

• Nivel de Bioseguridad 3

Se encuentra en los laboratorios clínicos, de diagnóstico, algunos laboratorios universitarios y también de investigación, en el cual se realiza trabajo con agentes exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalación o exposición a los mismos.

• Nivel de Bioseguridad 4

Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida.

1. Enumerar los requisitos básicos para trabajar en el Laboratorio de Microbiología

Nunca debemos olvidarnos de cumplir con estos dos requisitos básicos:

• Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de contaminación
• Evitar que los microorganismos ambientales presentes en la piel, pelo, aire, ropa, etc., contaminen sus muestras

1. Indique los procedimientos de manipulación y eliminación de material y desechos contaminados en el Laboratorio de Microbiología.

La peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el tipo de microorganismo y la manipulación a la que es sometido. Por ello es básico:

• Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
• Conocer la metodología de trabajo del laboratorio.
• Conocer el equipamiento del laboratorio.
• Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
• Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biológica.
• Respetar y hacer cumplir todo lo anterior.

Para que se produzca un accidente por agente biológico deben concurrir básicamente cuatro elementos:

• Un huésped susceptible
• Un agente infeccioso
• Una concentración suficiente de éste
• Una ruta de transmisión apropiada.

De todos ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de transmisión. Las rutas de transmisión más comunes en el laboratorio son la aérea y la inoculación directa, muy por encima de todas las demás, aunque la oral, la percutánea y el contacto directo con la piel o las mucosas también son posibles.

1. ¿Qué medidas deben tomarse en el caso de ocurrir un derrame de algún cultivo microbiano?

Los accidentes en el laboratorio deben se abordados con calma y ser debidamente reportados, en caso de ocurrir un derrame de material infeccioso, se debe despejar la zona y, usando guantes, se debe colocar un papel absorbente impregnado con un desinfectante (alcohol 70º-yodado) sobre el material. Si cae material contaminado sobre su piel, se debe proceder a desinfectar utilizando alcohol 70º-yodado, para luego lavar abundantemente con agua y jabón y aplicar nuevamente la desinfección. Si se presenta una contaminación de los ojos, proceda a enjuagar abundantemente con agua en la ducha facial respectiva. En caso de presentarse un incendio se debe utilizar un extintor para fuegos tipo ABC y si una persona en el laboratorio se está incendiando, se le debe cubrir con una gabacha mojada para apagar las llamas.

CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN N#2 OBSERVACION DE MICROORGANISMOS

1. Indicar y explicar  las maneras como puede ser fijado un frotis.

REALIZACIÓN DEL FROTIS

1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

1. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.

Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

1. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el portaobjetos a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el portaobjetos pues las células pueden deformarse o romperse.

FIJACIÓN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

1. Por calor: Pasar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el portaobjetos entre los pases.

Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tinción.

1. Cuáles son las diferencias existentes entre tinción simple y tinción diferencial?

• TINCIÓN SIMPLE: Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).

• TINCIÓN DIFERENCIAL: Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química. (Tinción de Gram, Coloración de ácido resistencia)

1. Graficar qué pasa con la capa de péptido-glicano de las bacterias en la tinción GRAM.