Microbiologia

REACCIONES DE PRECIPITACION EN GEL (OUCHTERLONY)

Objetivo

Efectuar una reacción de precipitación por medio de pruebas inmunológicas de laboratorio.

Introducción

Uno de los principales retos de la ciencia médica moderna es la traducción de los adelantos básicos de la inmunoquimica y la inmunobiologia en procedimiento de diagnóstico y terapéutica que serán de utilidad en la práctica de la medicina clínica.

Las pruebas inmunológicas de laboratorio (de las que efectuaremos en algunas prácticas posteriores) son de gran utilidad para el diagnóstico y el tratamiento de los trastornos clínicos, así como del mejor entendimiento de la patogenia de las enfermedades como la investigación científica básica en inmunología.

Las interacciones antígeno-anticuerpo pueden dividirse en 3 categorías:

• Primaria

• Secundaria

• Terciaria

La interacción primaria o inicial de antígeno con anticuerpo es el acontecimiento fundamental; consiste en la unión de antígeno con una molécula de anticuerpo.

La medición de las interacciones primarias de antígenoanticuerpo puede lograrse con varias técnicas, (precipitación de sulfato de amónico, inmunofluorescencia, marca con ferrita etc.) estos métodos están alcanzando valor clínico para medir anticuerpos importantes en los procesos patológicos.

Las manifestaciones secundarias de la reacción antígenoanticuerpo incluyen:

• Precipitación

• Aglutinación

• Reacciones que dependen del complemento

• Neutralización

• Efectos citotropicos

Estas reacciones tienen importancia práctica para el médico, ya que constituyen la base de cierto número de pruebas de laboratorio utilizadas para descubrir e identificar antígenos, anticuerpos o complejos de antígenoanticuerpo que intervienen en procesos patológicos.

Las interacciones antígeno-anticuerpo a veces se expresan como manifestaciones terciarias, tales reacciones por definición, son expresiones biológicas de la interacción antígeno-anticuerpo y pueden ser útiles para el paciente, pero en otras ocasiones son causa de enfermedad por lesión inmunológica.

Pueden obtenerse aún más datos sobre las reacciones complejas entre antígeno y anticuerpo mediante un método simple, desarrollado principalmente por Ouchterlony en Suecia, que consiste en poner soluciones de antígeno y anticuerpo en pocillos separados dispuestos en una placa de agar. Con este método son posibles muchas alineaciones geométricas.

Los reactivos se difunden a partir de los pocillos, y se forman bandas de precipitación, si la concentración de anticuerpo introducido se halla en cantidad excesiva en relación con el antígeno la banda se forma, en primer lugar, junto a la cavidad del antígeno; y ocurre a la inversa si el antígeno se introduce en cantidad relativamente excesiva.

Las disposiciones que se muestran en la siguiente figura son particularmente útiles para comparar los antígenos o antisueros ante la presencia de componentes idénticos o que muestran reacción cruzada.

Reacciones de precipitación por doble difusión en el gel de agar que muestran reacciones de identidad, no identidad e identidad parcial.

En “A” se colocó el mismo antígeno en los pocillo 1 y 2, y el antisuero se hallaba en el pocillo 3.

En “B” se colocaron distintos antígenos en los pocillos 4 y 5 y el antisuero para ambos se hallaba en el pocillo 6.

En “C” el antígeno y su correspondiente antisuero estaban en los pocillos 7 y 9 respectivamente, y el pocillo 8 se colocó un antígeno de reacción de cruzada.

Si se pone una solución de antígeno puso en dos pocillos adyacentes, y se coloca el anticuerpo homólogo en el pocillo central, se observa que las dos bandas de precipitación se unen en sus extremidades contiguas y se funden, este tipo llamado reacción de identidad se observa siempre que reaccionan sistemas de antígeno-anticuerpo.

Por otra parte si se colocan los antígenos no relacionados en pocillos adyacentes y difunden hacia un pocillo central que contiene anticuerpos para cada uno de ellos, las dos bandas de precipitación se forman independientemente y llegan a cruzarse, y lo llamamos, y

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