Microbiologia

Las actividades enzimáticas son ampliamente utilizadas para diferenciar a las bacterias. Incluso las bacterias estrechamente relacionadas pueden ser separadas en especies diferentes mediante el empleo de pruebas bioquímicas, por ejemplo para determinar su capacidad de fermentar un conjunto de hidratos de carbono seleccionados (Gerard, 2007). Todas las reacciones de cultivo así como las bioquímicas, dependen de la composición del medio y de la naturaleza del cultivo que se estudie. Los microorganismos necesitan nutrientes apropiados así como condiciones ambientales favorables. En primer lugar el medio de cultivo debe contener aquellos nutrientes esenciales para el crecimiento de una determinada especie. Un medio de cultivo es cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos, puede ser llamada un medio o, dicho con mayor precisión un medio de cultivo. Las pruebas bioquímicas son un método utilizado para la identificación definitiva de una especie de microorganismo. Al realizar estas pruebas te permite conocer las actividades metabólicas, enzimáticas e identificar los productos finales de los procesos metabólicos además de reconocer las reacciones de los microorganismos o bacterias ante pruebas bioquímicas con carbohidratos, y el porqué de esa reacción. Estas pruebas generalmente determinan la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. El propósito de estas pruebas bioquímicas es ver las diferentes reacciones que tiene un microorganismo desconocido en diferentes medios y de acuerdo a esas reacciones que ocurran poder identificar esa especie microbiana. Se trata de inocular microorganismos en medios de cultivo adecuados para observar su crecimiento.

Materiales y Métodos

Antes de realizar las pruebas bioquímicas para determinar el microorganismo desconocido, primero se realizó una tinción gram para poder determinas si era coco gram + o bacilo gram + o -. Primero antes de la tinción, se lavaron las laminillas y se dejaron secar. Luego se esterilizo la aguja loop en el mechero y luego se esterilizo el cuello del tubo del microorganismo desconocido y se colocó un loop del microorganismo en el medio de la laminilla y con la aguja loop se esparció en la laminilla y después se volvió a esterilizar la aguja loop. Luego de que se realizó el frotis, se fijó en el mechero pasando la laminilla de dos a tres veces por la llama. Luego de que la laminilla se secó, se le agregó el tinte cristal violeta durante minuto, se enjuago con agua destilada y luego se agregó Iodo gram por un minuto y después se enjuago con agua destilada. Después se añadió alcohol al 95 % y sin esperar tiempo se enjuago con agua destilada. Luego se le añadió el contratinte y se dejó por 45 segundos y después se enjuago con agua destilada. Al final después de terminar con los tintes, se secó la laminilla con la libreta de papel de secado cuidadosamente.

Luego de que la laminilla estaba seca y preparada, se observó en el microscopio pero antes de poder observarla había que limpiar los objetivos. Se colocó la laminilla y con el objetivo 4X que es el objetivo de rastreo se buscó el microorganismo, después de que se rastreó con el objetivo 4X se colocó el objetivo de baja potencia 10X, luego se colocó el objetivo de alta potencia 40X hasta que finalmente cuando se colocó el objetivo 100X que es el de inmersión de aceite pero antes de que se pusiera el objetivo se agregó una gota de aceite, se colocó el objetivo y se pudo ver si la bacteria era coco o bacilo y si era gram positiva o negativa.

Después de que se determina que el microorganismo es bacilo o coco, gram positivo o negativo, se realizaron las pruebas bioquímicas para determinar cuál es el microrganismo desconocido. Los medios que se utilizaron son: Fermentación de Carbohidratos: lactosa, dextrosa y sucrosa, Producción de H2S, Reducción de Nitrato, Indole, Methyl Red, Vogues Proskauer, citrato ureasa y un plato de TSA. Se inocularon los tubos con el microorganismo desconocido utilizando la aguja loop y la aguja recta siguiendo las técnicas asépticas para evitar la contaminación de las pruebas y asegurándose de esterilizar el loop y la aguja recta antes y después de cada inoculación. La prueba Indole se inoculo con el microorganismo con la aguja recta haciendo un estocado. La prueba de Citrato se inoculo con la aguja recta con microorganismo haciendo un estocado y

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