EFECTO DEL pH Y DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
Enviado por EstrellaSofia598 • 31 de Mayo de 2017 • Prácticas o problemas • 878 Palabras (4 Páginas) • 273 Visitas
EFECTO DEL pH Y DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
INTRODUCCIÓN
La cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como el pH y la concentración de la enzima.
De forma general, la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente es proporcional a la cantidad de enzima en la mezcla de ensayo, según: v0 = k [E]
La actividad de un enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la reacción. La curva actividad-pH puede ser diferente para cada tipo de enzima. En el caso más general la curva tiene forma de campana. El valor de pH al cual la actividad es máxima se denomina pH óptimo. La relación entre el pH y la actividad depende del comportamiento ácido-base del enzima y del propio sustrato.
Sustrato y enzima (centro activo) pueden contener grupos funcionales ácidos y básicos, siendo su grado de disociación dependiente del pH, lo que determinará, entre otros aspectos, la conformación de la proteína, la capacidad de unión del sustrato al centro activo del enzima (Km) y la capacidad de transformación del sustrato (kcat). Los estudios cinéticos a diferentes valores de pH nos proporcionan información sobre el mecanismo catalítico de los enzimas y la naturaleza de los aminoácidos más directamente implicados en la catálisis.
OBJETIVO
- Conocer la importancia del pH del medio sobre la velocidad de una reacción enzimática
- Analizar el comportamiento grafico de la velocidad de reacción enzimática contra la concentración de la enzima
RESULTADOS
Tabla 1.1 Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción
Tubo No. | T | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Sacarosa 0.2 M (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Regulador de acetatos 0.05 M pH = 4.7 (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Agua (mL) | 0.5 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.0 |
Enzima 10 μg / mL (mL) | 0.0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
Absorbencia | 0 | 0.231 | 0.660 | 0.687 | 0.880 | 0.855 |
[A.R] μmoles | 0 | 2.6 X 10-3 | 7.5 X 10-3 | 7.8 X 10-3 | 10.0 X 10-3 | 9.7 X 10-3 |
V0 μmoles / min | 0 | 2.6 X 10-4 | 7.5 X 10-4 | 7.8 X 10-4 | 10.0 X 10-4 | 9.7 X 10-4 |
Concentración de enzima (μg/2.0) | 0 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 |
Tabla 1.2 Efecto del pH sobre la velocidad de la invertasa
Tubo No. | T | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Sacarosa 0.2 M (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Regulador de citratos 0.2 M (0.5 mL) | pH = 5 | pH = 3 | pH = 4 | pH = 4.5 | pH = 5.0 | pH = 6.5 | pH = 8 |
Agua (mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Enzima 10 μg / mL (mL) | 0 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Absorbencia | 0 | 0.11 | 0.112 | 0.072 | 0.410 | 0.158 | 0.179 |
[A.R] μmoles | 0 | 1.2 X 10-3 | 1.25 X 10-3 | 0.8 X 10-3 | 4.6 X 10-3 | 1.75 X 10-3 | 2 X 10-3 |
V0 μmoles / min | 0 | 1.2 X 10-4 | 1.25 X 10-4 | 0.8 X 10-4 | 4.6 X 10-4 | 1.75 X 10-4 | 1.75 X 10-4 |
CÁLCULOS
Velocidad de la reacción
[pic 1]
[pic 2][pic 3]
(Se utiliza el mismo procedimiento para los 5 tubos problema en los dos casos, pH y efecto de la concentración de enzima, con el valor de azúcar reductor obtenido al interpolar la absorbancia a 540 nm en nuestra curva tipo (Gráfica 1))
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