Reacción de Aminoácidos y Proteínas
Enviado por Arturo RC • 23 de Septiembre de 2018 • Prácticas o problemas • 1.102 Palabras (5 Páginas) • 107 Visitas
Instituto Politécnico Nacional.[pic 1][pic 2]
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Químico Farmacéutico Industrial
Bioquímica General
Sección 2. Equipo: Rentería Castelán Arturo
Grupo: 3FM1 Sánchez Hernández María de la Luz
PRECIPITACION, SEPARACION, Y PUNTO ISOELECTRICO DE PROTEINAS
Introducción
La solubilidad es la medida de una cierta sustancia con capacidad de disolverse en un determinado medio, a una temperatura y presión determinadas. Las proteínas en disolución muestran grandes cambios en su solubilidad, en función de 1) concentraciones salinas, 2) disolventes orgánicos, 3) pH y 4) temperatura. Estas variables que son el reflejo del hecho de que las proteínas son electrolitos de peso molecular muy grande, pueden utilizarse para separar mezclas de proteínas, ya que estas poseen una composición en aminoácidos característica, la cual determina su comportamiento como electrolito.
El punto isoeléctrico se define como el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molécula. En el punto isoeléctrico la carga neta de la molécula es cero (0). En los aminoácidos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino, fenólicos y tiólicos.
Objetivos.
Analizar los factores que alteran la solubilidad de las proteínas, en base a las diferentes reacciones mostradas en el manual de prácticas.
Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, sometida a diferentes valores de PH.
Adquirir destreza en el laboratorio, haciendo uso adecuado del material y reactivos de forma rápida y eficiente.
Resultados
[pic 3][pic 4]
Tabla 1; Salting- Out
Biuret | |
Precipitado 1 + 2ml agua destilada | + Positivo |
Sobre nadante 1ml | + Positivo |
Saturado de sulfato de amonio solido | +Positivo |
Filtrado liquido | -Negativo |
Observaciones; Al agregar solo 1 ml de sulfato de amonio saturado a la solución de clara de huevo diluida, desaparece el color opalescente del tubo, y al agregar los 5 ml restantes se torna turbio.
Tabla 2. Precipitación por efecto del PH y solventes
HCl 0.1M | NaOH 0.1M | Regulador PH 4.7 | |
Clara de huevo filtrada | precipitado (+) | Transpa-rente | Precipitado |
Adición de Etanol | Precipitado (+++) | Transpa- rente | Precipitado (+) |
Tabla 3. Precipitación por metales pesados
Metales | Clara de huevo diluida (mL) |
Cloruro de mercurio 5% | Precipitado (++++) |
Nitrato de plata 2% | Precipitado(+++) |
Acetato de pomo 5% | Precipitado (+) |
Cloruro de bario 5% | Turbidez blanquecina |
Cloruro de sodio 5% | Transparente |
Tabla 4. Determinación del punto isoeléctrico de insulina
Tubo No. | Ac acetico | Acetato de Na | Insulina | Observaciones |
1 | .23 ml | .02 ml | .06 ml | Transparente |
2 | .15 ml | .10 ml | .06 ml | Transparente |
3 | .05 ml | .20 ml | .06 ml | Turbio |
4 | .01 ml | .24 ml | .06 ml | Ligeramente turbio |
5 | - | .25 ml | .06 ml | transparente |
Discusión
- Salting-Out;
A altas fuerzas iónicas la solubilidad de las proteínas disminuye. Esto ocurre por la competencia que establece la sal de sulfato de amonio y la proteína por el agua del medio, una vez formada la esfera de solvatación, las proteínas quedan con cargas libres, como consecuencia, estas se atraen formando una aglomeración proteína-proteína que se manifiesta en forma de precipitado.
...