STEVIA RE

Estudio Comparativo in Vitro de Stevia rebaudiana (Stevia), en cuatro marcas comerciales, en la inhibición de la proliferación de Streptococcus mutans

Estudio Comparativo in Vitro del efecto inhibitorio (del extracto en polvo de las hojas)^[a] de Stevia rebaudiana (en cuatro de sus marcas comerciales) ^[b]sobre la proliferación de Streptococcus mutans

PROPÓSITO

En esta investigación se busca comprobar que la Stevia rebaudiana (Stevia) es efectiva para inhibir el crecimiento bacteriano de Streptococcus mutans realizando un estudio comparativo de su efecto inhibitorio utilizando cuatro marcas comerciales de la misma y comparando su efecto. Asimismo, esto nos dará a conocer que ^[c]la Stevia posee principios activos anticarogénicos, lo que permitirá que ésta se desarrolle en otros campos adicionales al alimenticio.

PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN

¿Cuál es el efecto de la Stevia rebaudiana (Stevia) de cuatro marcas comerciales ^[d]en el crecimiento de Streptococcus mutans?

ANTECEDENTES

La Stevia rebaudiana es una planta originaria de Sudamérica cuyas hojas poseen un dulzor natural. En la antigüedad, los pueblos indígenas solían masticarlas y usarlas para endulzar sus bebidas de forma natural justamente por esta característica. Contienen distintos componentes de sabor dulce denominados glucósidos de esteviol y de éstos, 11 son los más abundantes y se caracterizan por tener un sabor e intensidad de dulzura diferentes, llegando a ser entre 200 a 350 veces más dulces que el azúcar y además no aportan calorías (Global Stevia Institute, 2017).

Estos glucósidos de esteviol son los que se extraen de la planta al momento de purificar y procesar sus hojas para obtener lo que hoy en día conocemos como edulcorante natural. Polvo blanco, en algunos casos cristalino, que tiene como fin ser un endulzante alternativo al azúcar doméstico. Su producción ha ido aumentando a lo largo de los años pues es un gran beneficio a la salud al no dar calorías, ser apto para personas diabéticas (ya que regula el nivel de glucosa e insulina en la sangre) y ayudar a bajar de peso (Cordón, Durán, Record y Rodríguez, 2012) siendo aportes importantes para mantener una vida saludable.  

Adicionalmente, existen estudios^[1] que demuestran las propiedades antimicrobianas, antitumorales y antibacterianas del extracto de las hojas de Stevia rebaudiana que han dado lugar a que nuevas investigaciones surjan para aprovechar las capacidades de esta planta.

Centrándonos en el aspecto antibacteriano, en esta investigación se pondrá a prueba esta propiedad, con la inhibición in Vitro de la bacteria Streptococcus mutans, bacteria que “constituye la primera causa de caries dental” (Adrighetti, Braun, Dabanch, Engaña y Porte, 2009). Es muy importante buscar mecanismos que permitan inhibir el crecimiento de ésta en la cavidad oral, pues el problema de las caries dentales prevalece en la actualidad y su nivel de existencia es claro teniendo como referencia un estudio realizado por la Organización Mundial de la Salud en el año 2012, el cual establecía un 60% y 90% en las poblaciones de niños y adolescentes y casi 100% en los adultos en todo el mundo. En base a esta información, realizaré un estudio in Vitro ^[e]del efecto antibacteriano del extracto en polvo^[f] de las hojas de Stevia empleando cuatro de las marcas comerciales más consumidas de mi localidad de la misma, siendo estas “Stevia Life”, “Dulce Vida”, “Stevia” y “Nutra Stevia”.^[g][h]

HIPÓTESIS

Si consideramos ^[i]las propiedades antibacterianas de la Stevia rebaudiana (Stevia), es posible ^[j]que ésta sea capaz de inhibir el crecimiento bacteriano de Streptococcus mutans.

VARIABLES

• Variables independientes: ^[k]“Stevia Life” (1), “Dulce Vida” (2), “Stevia” (3) y “Nutra Stevia” (4).
• Variable dependiente: Tasa de crecimiento bacteriano.
• Variable controlada: Temperatura (37°C), tiempo de incubación de cepa (24 horas), tiempo de incubación de Streptococcus mutans en placas Petri (48 horas), tiempo de incubación con discos de sensibilidad (24 horas), concentración de Stevia por disco (0,1g en 250ml de agua estéril)

MATERIALES

• Cuatro presentaciones^[l] comerciales: “Stevia Life”, “Dulce Vida”, “Stevia” y “Nutra Stevia”

• 5 placas Petri
• Balanza electrónica
• Agar tripticasa de soya
• Estufa Memmert
• Discos de sensibilidad
• Cepa ATCC 25175 Streptococcus mutans
• Un litro de agua estéril
• Vernier Uyustools Professional (±0,01mm)
• Tubos de ensayo
• Mechero
• Caldo BHI
• Hisopos estériles
• Papel Kraft
• Gradilla de metal

SEGURIDAD: Durante todo el desarrollo de la metodología de investigación se utilizó mandil, guantes, lentes de seguridad, máscara y gorro de laboratorio descartable.

PROCEDIMIENTO

1. Rehidratación e Incubación de la cepa estandarizada

1.  La cepa de Streptococcus mutans es liofilizada en el caldo BHI y se incuba 24 horas a 37°C.
2.  Se prepara un inóculo según la escala de Mc Farland de 0,5 de turbidez (equivalente a 1,5 x ).[pic 1]
3.  Se inoculan las 5 placas Petri que contienen el Agar tripticasa de soya.
4.  Se utiliza el método de difusión en disco Kirby-Bauer empleando un hisopo estéril saturado del inóculo.
5.  Terminado esto se procede a incubar las placas durante 48 horas a 37°C.

1. Preparación de los discos de sensibilidad (luego de las 48 horas de incubación de Streptococcus mutans)

1.  Se prepara una muestra de cada Stevia a utilizar según la dosificación indicada en la presentación.
2.  Se disuelve 0,1 g de Stevia en 250 ml de agua, tal como se consume como edulcorante.
3.  Una vez hecho esto con las cuatro Stevias, los discos de sensibilidad fueron sumergidos en las muestras y posteriormente se los hizo secar, quedando listos para la acción antibacteriana probada in vitro.

1.  Estudio de sensibilidad

1.  Se coloca los discos impregnados de Stevia, los cuales previamente fueron secados, en las placas Petri ya incubadas durante 48 horas.
2.  Se incuban las placas Petri con los discos de sensibilidad a 37 °C, en condiciones anaerobias, durante 48 horas.
3.  Cada placa posee 4 discos, cada uno con diferente solución de Stevia.
4.  Pasadas las 48 horas se procede a medir el diámetro del halo de inhibición formado alrededor de los discos con vernier (margen de error ±0,01mm).
5.  Se anotan los resultados para luego aplicar estadística.

RESULTADOS

Los resultados de la medición de los halos de inhibición obtenidos por acción de las cuatro marcas empleadas se muestran en la tabla 1 y gráfico 1 que aparecerán a continuación.

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