Concha

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COLEGIO MAYOR SECUNDARIO PRESIDENTE DEL PERÚ COAR – LIMA

BACHILLERATO INTERNACIONAL

Programa del Diploma[pic 8][pic 9]

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: CATALASA

DISEÑO

Aspecto 1: Definición del problema y selección de variables

INTRODUCCIÓN

El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Esta función la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno, y es por esto que recibe el nombre de catalasa. En este laboratorio pretenderemos reproducir el fenómeno de canalización por medio de la ya mencionada encima con el objetivo de aprender más de su funcionamiento como también  de sus funciones.                                                                            

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

¿Cómo influye la concentración del sustrato en la actividad enzimática de la catalasa medida a través de la concentración de O2?

Aspecto 2: Control de variables

VARIABLES

VARIABLES INDEPENDIENTES:

• Las diferentes concentraciones de sustrato.

VARIABLES DEPENDIENTES:

• La cantidad de oxígeno.

OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES

Objetivos:

• Medir la actividad enzimática de la catalasa tomando como factor la concentración de la catalasa.

MATERIALES:

• Hígado 3g
• Peróxido de hidrógeno (H2O2) 20ml
• 50 ml de agua (H2O)
• 3 probetas
• 1 beaker
• 1 vaso precipitado
• 1 jeringa
• 1 bagueta
• 1 pipeta
• Medidor de oxígeno
• 1 cronómetro
• 5 matraz
• Mortero
• Balanza
• 1 tapón de matraz

PROCEDIMIENTO:
1. Preparación del sustrato

• Verter 20 ml de peróxido de hidrógeno (H2O2) en una probeta
• Verter 10 ml de agua (H2O) en una probeta
• Combinar los dos compuestos en una probeta

2.  Preparación de la enzima

• Triturar hígado en un mortero y pesar 3g de este
• Agregar 30 ml de agua en un beaker de 500ml
• Agregar los 3g de hígado al beaker, mezclar con la pipeta y dejar reposar por 5 minutos
• Decantar la mezcla a un vaso precipitado y la enzima está lista

3. Método del sensor

• Con una jeringa succionar 1 ml de la enzima
• Con una bagueta succionar 5 ml del sustrato
• En el matraz combinar la enzima y el sustrato y tapar inmediatamente con el tapón
• Dejar por un minuto para que la mezcla reaccione
• Cambiar inmediatamente el tapón por el medidor de oxígeno (PPP) y observar los datos que aparecen en la computadora
• Repetir la experiencia 4  veces y reunir los datos correspondientes

4. MÉTODO CON TUBO DE ENSAYO

Preparar el sistema para la obtención del oxígeno:

• Montar el soporte universal y colocar el tubo de precipitado invertido.
• Llenar la cubeta de agua y colocar dentro de esta el tubo invertido.
• Preparar un tubo de ensayo con las concentraciones y colocarle un tapón de goma.
• En el tapón de gomo colocar la jeringa y la manguera, de manera que este también conectada con el tubo de precipitado invertido. Seguir el siguiente modelo:

PARA MEDIR LA CANTIDAD DE OXIGENO LIBERADO:

• El tubo de ensayo contiene 5 mL de H2O2 (peróxido de hidrogeno).
• Agregarle a través de la jeringa 1 mL de enzima; es decir el líquido decantado del hígado.
• Esperar que l muestra empiece a reacción, por 2 minutos.
• Luego de esto quitar la manguera del tubo de precipitado invertido.
• Repetir la experiencia 4  veces y reunir los datos correspondientes

• Obviamos los datos de las concentraciones de 5  porque solo tenía una repetición y no es muy fiable, también el de 15 porque en ese procedimiento utilizamos el método del tubo de ensayo, este método se cuantificaba en ml por lo que no estaba en las mismas unidades que las otras concentraciones.
• Para hallar la media se utilizó la siguiente fórmula:[pic 10]
• Colocamos la desviación estándar para calcular la variabilidad de datos del número de repeticiones. Para ello se utilizó la siguiente fórmula:
• [pic 11]

• [pic 12]
• En la gráfica podemos observar que la concentración de O2 al 20 y 25 las barras se solapan por lo que no hay mucha diferencia entre estos valores. La relación que existe es que mientras más concentración de sustrato H2O2, la cantidad de O2 va aumentando.

CONCLUSIÓN Y EVALUACIÓN

1. Conclusión:

Para concluir este informe, primero, debo citar La página de buenas tareas.com, el cual me dio la pauta para poder llevar a cabo la experimentación y procesamiento de datos, de acuerdo a este capítulo, la actividad enzimática de la catalasa se podrá medir conforme el oxígeno sea liberado, en este caso podemos concluir que  existe una relación entre la concentración de sustrato  y  la actividad de la misma (Catalasa), mientras más concentración haya, mas proteínas pasaran por el sitio alosterico y más oxigeno se desprenderá, tal y como se puede apreciar en la tabla número 2.

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